杜氏盐藻高纯度叶绿体DNA的提取.pdfVIP

( ) Jou rnal of Zhengzhou U n iversity M edical Science s 　Nov. 　2008　Vol. 43　No. 6 ·1127 · 杜氏盐藻高纯度叶绿体 D NA 的提取 曲东京 1) 　李 　杰 1) 　潘卫东2) 　贾彦龙 1) 　薛乐勋 1) # ) ) 1 郑州大学生物工程系细胞生物学研究室 郑州 450052　2 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室 郑州 450001 #通讯作者 ,男 , 64 岁 ,教授 ,博士研究生导师 ,研究方向:生物工程 , Em ail: lxxue@pub lic2. zz. ha. cn 　　关键词 　杜氏盐藻 ; 叶绿体 ; DNA 提取 　　中图分类号 　Q781 　　摘要 　目的:分离大量完整的杜氏盐藻叶绿体 ,提取高纯度的叶绿体 DNA ( cpDNA ) 。方法 :取对数生长后期的 杜氏盐藻细胞进行高压破碎 ,利用差速离心和蔗糖密度梯度离心得到完整的叶绿体 。采用优化的 SD S蛋白酶 K 酚 /氯仿 /异戊醇方案抽提 cpDNA ,并经 10 g/L 琼脂糖凝胶电泳鉴定 。结果 :蔗糖密度梯度离心结果表明分离到了 大量的叶绿体 ,相差显微镜及电镜观察证实所得叶绿体的完整性 。紫外分光光度仪检测 3个批次 cpDNA 的浓度蛋 ( ) ( ) ( ) ( ) 白酶为 2. 2 1 ±0. 02 m g/L ,A 260 nm /A 280 nm 为 1. 772 ±0. 0 12 。结论 :获得了高纯度的杜氏盐藻 cpDNA , 为进行叶绿体的转化研究奠定了实验基础 。 Extraction of chlorop last DNA w ith high purity from D una liella sa lina 1) 1) 2) 1) 1) QU D ongj ing , L I J ie , PAN W eidong , J IA Yan long , X UE L ex un 1) L abora tory f or Cell B iology, D ep a rtm en t of B ioeng ineering, Z hengzhou Un ivers ity, Z hengzhou 450052 　 2) D ep a rtm en t of M icrobiology and Imm unology, Colleg e of B as ic M ed ica l S ciences, Z hengzhou Un ivers ity, Z hengzhou 450001 　　Key word s　D una liella sa lina; ch lorop la st; DNA extraction 　　Ab stract　A mi : To iso late a m a ss of intact ch lorop la sts of D. sa lina and extract cpDNA w ith h igh pu rity. M e tho d s: Cells of D. sa lina from the late log p hase of grow th were broken by slow extru sion at 250 Pa through h igh p re ssure cell bomb. Intact ch lorop la sts were ob tained by differential centri