锯缘青蟹纳精囊精子顶体酶活力研究.pdfVIP

第24卷 第6期 海 洋 通 报 VOl|24．No．6 2005年 12月 MAR1NE SCIENCEBULLETIN Dec．2005 锯缘青蟹纳精囊精子顶体酶活力研究 管卫兵，王桂忠，李少菁，陈锦民 (厦门大学海洋系、亚热带海洋研究所、海洋环境科学教育部重点实验室，福建 厦门 361005) 摘 要：项体酶是精子项体部特有的胰蛋白酶，其在顶体反应、精子和透明带的结合及穿透中起重要作 用。本文采用测定精子项体氨基化酶活力方法来测定锯缘青蟹 (Scyllaserrata)精子的项体酶活力。据测 定，青蟹纳精囊精子项体酶活力分别为 3．566uIU／10和 4．248uIU，10。青蟹精子顶体酶活力和用同样 方法测定的其它物种 (如猪、人、马)相比较低。这反应了不同物种之间的精子项体酶活力存在着较显著 的差异，也反应青蟹纳精囊中精子处于一种抑制状态。这种精子活力抑制方式可能有利于精子在纳精囊中 的长期存活。本实验结果也说明，临床应用的项体酶测定方法也可以用于蟹类精液质量的评价。 关键词 ：锯缘青蟹；项体酶；精子；纳精囊 中图分类号：P735 文献标识码：A 文章编号：1001—6392(2005)06-0087—05 精子顶体酶是精子顶体部特有的胰蛋 白酶。在顶体反应、精子和卵子透明带的结合及穿 透中起重要作用。一般顶体酶是以末激活的原顶体酶前体形式存在，在顶体反应时通过特定 的蛋 白水解作用而激活，顶体酶原释放 。前顶体酶和顶体酶的活力是由精桨和精子中的顶 体酶抑制剂控制的，主要 由其中几种丝氨酸蛋白酶抑制剂调控 。 精子中的顶体酶活力测定方法有多种。如可以通过放射性免疫 (RIA)法，ELISA法，明 胶薄层法 ，SDS法 ，或通过水解精氨酸氨基化物底物产生一定的光密度来测定 。 最后一方法证实可以提供一个简单的方法测试对苯甲脒敏感的精子氨基化物的活力，这显然 来 自于精子的顶体酶 。这一方法由于其简单易行，已被众多国外学者采纳 。国内也有 多个作者将该方法应用于生殖医学上，作为评价男性生殖能力的一个指标 …一。 甲壳动物中还没有关于顶体酶的相关研究，大部分甲壳动物尤其是蟹类，交配后精子在 雌蟹纳精囊中有一个长期的存活过程，存活机制还没有完全研究清楚 。本文采用 Kennedy方法，适当加以调整，对锯缘青蟹纳精囊中的精子顶体酶的活力进行了初步的测 定，为探求纳精囊中精子活力保持机制提供一些基本研究资料。 l 材料和方法 1．1 器材 高速台式离心机、冰箱、751型分光光度计等。 1．2 主要试剂 NQ-苯 甲酰-DL-精氨酸-P-硝酰基苯胺 (NQ-benzol-DL-arginine-P-nitroanilide，BAPNA)， 苯 甲脒 (Benzamindine)，400型聚蔗糖 (Ficoll400)(以上试剂由Sigma公司提供)，N-2-羟 乙基哌嗪-N-2-乙磺酸 (Hepens)，二甲亚砜 (DMSO)等。 收稿 日期收修改稿 日期：20o41221 基金项 目：国家 “863”高技术发展计划 (2o02AA603013) 海 洋 通 报 24卷 l_3 溶液 a)Ficoll液：ll％的Ficoll溶于 0．12mol／LNaC1，0．025MHepes缓冲液中，pH7．4～ 7．6。配制时将 O．23gNaC1，0．20gHepes和3．67gFicoll于 30mL去离子水中，采用HC1或 NaOH调整pH为7．4~7．6，最后溶液量加到33．3mL。加入叠氮纳 (Sodiumazide)33．3mg 以延长Ficoll的保存时间。 b)去污缓冲液：0．01％的TritonX一100溶于 0．055mol／LHepes，0．055mol／LNaC1中， pH为 8．0。配制时，将 1．3lgHepes，0．32gNaC1，lmL的0．1％TritonX一100溶于 95mL 的去离子水中，采用 lmol