高效液相色谱蒸发光散射检测器定量分析谷胱甘肽含量.pdfVIP

高效液相色谱一蒸发光散射检测器定量分析谷胱甘肽含量+ 林志兴，吕永琴，谭天伟 (北京化工大学生命科学与技术学院生物加工过程重点实验室，北京，100029) 摘 要 Cts，250×4．6mm，5pm)；流动相：V 量的方法，确定了高效液相色谱分离条件。色谱条件为：色谱柱(Kromasil (H20)：V(CH3CN)：V(TFA)一96．2：3．7：O．1；柱温：室温；流速：1．OmL／min；进样量：20弘L；漂移管温度 on模式；增益(Gain)：1。结果表明，在此条件下，GSH浓度的自然对数与 90℃；氮气流速：1．5L／min；impactor mg／L；加标回收率 峰面积的自然对数成很好的线性关系(R2一o．9995)；精密度2．15％；最低检测限30．73 99．78％。该方法快速、简便、准确，适合从复杂体系中快速检测谷胱甘肽的含量。 关键词 高效液相色谱，蒸发光散射检测器，定量分析，谷胱甘肽(GSH) 谷胱甘肽由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，全 称为L一7一谷氨酸一L一半胱氨酸甘氨酸(7一L—91utamyl—反相柱(KromasilC18，250×4．6mm，5弘m)定量分 L—cysteinyl—glycine，简称GSH)，其结构如图1所示。析溶液中的谷胱甘肽，与其他的方法相比，该测定方 H00C_一CH—CH2一CH2一c_一NH—CH—一C—NH—CH2—_(：00H 法具有快速简便，样品不用衍生化可直接进样，不用 9 8 0 O NH2 CH2 梯度洗脱，不受前体氨基酸及其他肽类物质干扰，在 SH 较短的时间内达到分离目的等优点，适合于从复杂体 图1 谷胱甘肽(GSH)化学结构图 系中快速检测谷胱甘肽的含量。 谷胱甘肽固体较为稳定，而水溶液在空气中则易 被氧化。还原型谷胱甘肽是细胞内非蛋白硫氢基团 1材料与方法一 的主要组成部分，在活组织中具有多种重要的生理功 1．1仪器与试剂 能：参与细胞内的氧化还原反应，是某些酶的辅酶，并 对一些巯基酶有激活作用；提供还原巯基使含巯基酶 A11tech2000型蒸发光散射检测器(ELSD)。 和蛋白巯基稳定，是保护酶和其他蛋白质硫氢基的一 种抗氧化剂；通过胞内代谢循环参与跨膜的氨基酸转 运；谷胱甘肽在细胞对外界异物的解毒和羟基过氧化 德国Merck公司。 物、自由基和亲电试剂的清除中起着重要作用；保护 1．2 色谱条件与ELsD参数 细胞抵御在正常及紫外线照射下形成的活性氧及衍 mm， 色谱条件：色谱柱(KromasilC18，250×4。6 生物的氧化损坏。同时谷胱甘肽在食品如面制品、奶 制品、肉类、海鲜类制品保鲜方面以及医学如肿瘤治 96．2：3．7：O．1；柱温：室温；流速：1．OmL／min；进 疗、作为解毒剂、临床其他方面乃至体育运动领域均 样量：20}IL。 有着广泛的应用前景。目前已报道的谷胱甘肽检测