分子伴侣SecB基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达.pdfVIP

13(4):433 ～436, 1997 Chin ese Journa l of B iotechn ology 　　　　　 SecB ＊ ＊＊ 周　颖　张　青　殷长传 　宋大新　陈永青 ＊ ( 　　200433) [1,2] (Chaperone) 。 [3,4] , 、 , [5, 6] , , 。SecB , 17kDa, 4～6 。, , pre-MBP , , [7] , , 。SecB , , 。 。 [8] , , 。, , , , 。 , , , , , 。 , SecB (Lymphotoxin, L ) , SecB 。 1　材料与方法 1.1 　 4 DNA Promega :A P, D , 。 1.2 　 SecB pAK330[9] ufts Carol A.Kumamoto ;pA- cYc184 Bio-Labs ;L pRSE C-L - - ;HB101[supE44hsd20(r m )recA13ara-14proA2lacY1galK2rpsL20xyl-5m tl-1] B B , ; BL21(DE3)[hsdSgal(λcIts857ind1 Sam7nin5lacUV5- 71)] , 。 1.3 　 [10] DNA , , , Sambrook 。 1.4 　SDS [11] (SDS) Lammile , 12.5%, [12] R-250 。Bradford , (BSA)。 , ＊＊。 1996 9 19 。 434 　　　　　　　　　　 13 1.5 　SecB LT CaCl , (Ap)(Cm)。 2 1.6 　 2ml LB(,Ap 100μg/ml, Cm 25μg/ml), 37℃ , 1%50ml LB , 37 ℃3 ～4 h OD590 0.6 ～ 1.0 , IP G 0.7mmol/L, 37 ℃, 2、4、6、8、10h 。 1.7 　LT , 4℃、5000r/min 5min, 。(50mmol/L ris- Cl, pH 8.0, 5%, 1mmol/L ED A, 100mmol/L KCl, 10 mmol/L β-), , 12000r/ min 15min, , 。 1.8 　 (L929), , L929 10%