禽流感研究概述(下).pdfVIP

维普资讯 2004年第 5期 (第 31卷 总第 162期) 叠麓感防嗣专一 参，_l 禽 娥 (下) 向顺禄 ，余 勇 ，霍 英 (1．四川省动物防疫监督总站，四川 成都 610041；2．四川省成都市兽医站，四川 成都 610041) 中图分类号 ：$858．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：l0ol一8964(2004)05-0013-03 (接 上期) 哈尔滨兽医研究所的李海燕等建立 RNA序列片段去检测未知的核酸样品， 5-3-2．5 免疫 荧光技术 (IFr) 免疫荧 了禽流感间接(重组核蛋白)ELISA诊断技 对作检测用的已知 DNA或RNA序列片 光技术就是荧光抗体技术(FAT)。IFT早 术(rNP-ELISA)。实验证明，P-EL1SA与 段加以标记的片段就称为核酸探针。作为 在 l961年就开始用于人类流感 的快速 全病毒间接ELISA fAIV—ELISA)，AGP及 核酸探针的DNA或 RNA是各种病原微 诊断。l984年美 国宾西法尼亚州爆发禽 }{I的符合率分别为99．9％，97．1％，98．8％； 生物基因的一部分 。在变性分开的待检 流感时Skeeles将 IFr首次用于AⅣ 的 并能 l00％检出AGP阳性及疑似 }{I阳性 DNA或 RNA单链 中加入与其有互补作 检测 。IFr最早用于病毒的鉴定和定位 的血清样品 ，这证 明了rNP—EUSA是检 用的核酸探针。探针在一定条件下就能与 病毒感染细胞中特异性抗原，主要是核 测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一 原来变性分开的DNA或 RNA单链上的 内荧光；用MP抗原的荧光抗体主要出 种特异 、敏感 、微量 、快捷 、经济的血清学 互补区段形成氢键 ，从而结合成杂交双 现胞质荧光，核内也有部分荧光。 诊断技术。 链 ，通过洗涤 ，除去未杂交上的标记物 ，然 常用直接荧光抗体法来检测 AIV， EUSA方法的敏感性和特异性与抗 后进行放射 自显影 ，即可确定原待检样品 即在组织触片上直接染色 ，以荧光显微 原的纯度直接相关。1984年Abraham等 有无与探针互补的DNA或 RNA序列。 镜检查荧光。 报道 了抗原快速提纯法 ，所需时间 比常 Bashiruddin等0991)报道了扩增 HA IFT具有快速 、简便 、敏感性好的特 规法缩短 l0倍 ，并且研究结果表明应 基因来分析致病毒株与非致病毒株的差 点，而且费用较低 。其敏感度 同病毒的 用提纯抗原几乎全部排 除了假 阳性 反 异，证实了致病毒株与非致病毒株氨基 分离鉴定相当，有时高于用鸡胚进行 的 应 。 目前 EUSA 已成为AI流行病学普 酸的差异，显示了本方法的应用前景。 病毒分离。但是需要注意的是如何避免 查及早期快速诊断的最有效和最实用 5．3-3-3 荧光 PCR法 利用生物学手 和降低标本中出现的假阳性 (非特异性 的方法 。 段 ，用荧光 PCR方法快速检测AIV的方 荧光)问题。 5-3-3 分子生物学技术 法 已在北京通过专家鉴定，这一研究成 间接 固相免疫荧光技术 的敏感性 5-3-3．1 聚合酶链反应 (PCR)及反转 果不仅在国内属于首次 ，而且在国际上 比HI高40—150倍。间接免疫荧光技术 录一聚合酶链反应 (RT—PCR) PC