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2013年第十五次全国养犬学术研讨会暨第七次全国小动物医学学术研讨会论文集 运用半巢氏PCR检测方法对区域犬 焦虫感染状况调查 冯小兰1庞雪林1钟友刚1 施振声1 (1．中国农业大学动物医学院，北京海淀100193) 摘要：犬焦虫病是一种近些年来在世界范围内呈区域性流行的新兴的传染病，其诊 断及流行病学调查具有重要意义。 为了调查我国深圳地区犬吉氏巴贝斯虫病与韦氏巴贝斯虫病感染状况，同时为小动 物临床引入敏感性和特异性较强的犬焦虫半巢氏PCR检测方法。试验于2011年6月至8 月在深圳地区采集97份有明显蜱接触史犬的外周血，对样本进行犬焦虫病原学检测。试 验采用半巢氏PCR方法针对18SrRNA高变区序列设计引物检测犬吉氏巴贝斯虫与韦氏巴 贝斯虫病原。 这表明深圳地区存在犬吉氏巴贝斯虫与韦氏巴贝斯虫的感染。 关键词：吉氏巴贝斯虫韦氏巴贝斯虫诊断半巢氏PCR 犬焦虫病是一种近些年来在世界范围内呈区域性流行的新兴的传染病。它是一种以 蜱为媒介的血源性寄生虫病…。引起犬焦虫病的病原主要有两种：大巴贝斯虫(B．canis) canis， 3。其中犬巴贝斯虫又包括三种亚型，分别为B．canis 和小巴贝斯虫(B．gibsoni)[2 B．eanis rossi[3]。犬焦虫病的典型临床特征主要表现为 vogeli(韦氏巴贝斯)和B．canis 溶血性贫血，血小板减少症，发热，脾肿大。其病程短，死亡率高。我国已报道的多为 吉氏巴贝斯虫感染，偶见韦氏巴贝斯虫感染。犬焦虫病在国内呈地方性流行，随着我国 养犬业的快速发展，近年来有流行和暴发的趋势，这对犬特别是警犬造成严重的危害。 J。 所以对本病的及早诊断和治疗格外重要M 为了调查我国深圳地区犬吉氏巴贝斯虫病与韦氏巴贝斯虫病感染状况，同时为我国 小动物临床引入敏感性和特异性较强的犬焦虫半巢氏PCR检测方法。试验于2011年6月 至8月在深圳地区采集97份有明显蜱接触史犬的外周血，对样本进行犬焦虫病原学检测。 rRNA高变区序列设计引物检测犬吉氏巴贝斯虫与韦氏 试验采用半巢氏PCR方法针对18S 巴贝斯虫病原。 1材料与方法 1．1实验动物来源 214 运用半巢氏PCR检测方法对区域犬焦虫感染状况调查 本试验于2011年6月至7月，对深圳市8犬场和1家宠物医院就诊病例，选取有蜱 感染或蜱接触史犬只，共97只犬采取外周血。 1．2主要试剂与仪器 PCR 血液基因组DNA提取试剂盒、2×TaqMasterMix(天根生化科技有限公司)， 仪DYY一6C型，北京市六一仪器厂)。 1．3样品DNA的提取 按血液基因组DNA提取试剂盒说明书操作。 1．4引物合成 192bp。 表1—1引物序列‘3】 ：-：引物由上海英骏生物技术有限公司合成 1．5样本的半巢氏PCR扩增 根据2003年Adam PCRMasterMix 第一步反应体系为20山，其中DNA模板l山，上下游引物各0．5斗1．Taq 10一，ddH208一。具体反应条件见表1-2。 表1—2半巢氏PCR第一步反应条件 215 2013年第十五次全国养犬学术研讨会暨第七次全国小动物医学学术研讨会论文集 第二步反应体系为两组，各20斗l，其中第一步反应产物1斗l，种特异性上下游引物各