高压液相色谱――荧光检测法测定蜂蜜中诺氟沙星环丙沙星和恩诺沙星残留量.pdfVIP

高压液相色谱——荧光检测法测定蜂蜜中 诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量 王圣义胡娟 张瑞廷胡婷余凌群 (湖北省扬子江蜂业有限公司，武汉430070) 摘要：建立了一种在碱性条件下，利用乙酸乙酯去除蜂蜜中的基质干扰物，通过SCX固相萃取小柱 净化样品，从而检测不同品种的蜂蜜中诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量的方法。不同加标水平的诺氟 N=3计，检测限分别为：2．3ng／g、3．3ng／g、3．2ng／g。 关键词：高压液相色谱法；荧光检测法；蜂蜜；诺氟沙星；环丙沙星；恩诺沙星；残留 1前言 光检测器(美国戴安公司)，SHZ一82A水浴恒温振荡 诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星属于“喹诺酮 类药物”(简称QNs)，具广谱抗菌活性，杀菌效果利达仪器厂)，TGL一16C台式离心机(上海安亭科学 好。作用机理是直接作用于细菌的核，抑制细菌的 仪器厂)，固相萃取装置(安捷伦科技有限公司)，乙 DNA旋转酶，使该酶不能在DNA双链上引入切口，腈、甲醇均为色谱纯，柠檬酸、乙酸铵、乙酸乙酯、氢 再重新封合。因此，从细菌核深处破坏了细菌的代 氧化钠均为分析纯，柠檬酸一乙酸铵混合盐溶液：分 谢和增殖，能迅速把细菌杀死，杀菌效果稳定。在养 蜂过程中，由于蜜蜂容易得病，因此，蜂农使用喹诺 蒸馏水溶解并稀释定容至1000mL，用三乙胺调节 酮类药物来预防和治疗蜂病。目前，美国、欧盟和日 pH为3．0，诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星对照品 本对蜂蜜中的喹诺酮类药物残留量有严格的限制， (中国兽医药品监察所)；SCX固相萃取小柱 例如，日本“肯定列表制度”规定“不得超过lOtLg／(100mg／mL，70盖，广州菲罗门科学仪器有限公司)， kg”，美国和欧盟的要求更为苛刻。 水为二次蒸馏水。 目前，在国内对喹诺酮类药物残留量的检测方 2．2色谱条件 法很多，有微生物法、荧光猝灭法、毛细管电泳法、 色谱柱：美国戴安ACCLAIM删120C18柱， 酶联免疫法、高效液相色谱法等。大多数蜂产品企 业目前采用ELISA方法对蜂蜜中喹诺酮类药物残 留量进行筛选检测，ELISA方法具备灵敏、快速的min；检测器：荧光检测器，激发波长280nm，发射波 特点，但无法将每一种喹诺酮类药物进行分开检 长450nm；柱温：400C；进样量：201xL。 测。作者通过对不同蜂蜜品种，包括油菜蜜、洋槐 2．3标准曲线绘制 蜜、荆条蜜、向日葵蜜和养麦蜜进行研究，建立了一 分别准确称取10．0mg的诺氟沙星、环丙沙星 种在碱性条件下，利用乙酸乙酯去除蜂蜜中的基质 和恩诺沙星，用0．Imol／L的氢氧化钠溶液溶解并定 干扰物，再通过SCX固相萃取小柱净化样品，从而 检测不同品种的蜂蜜中诺氟沙星、环丙沙星和恩诺 月)，此储备液浓度为lmg／mL。然后移取以上3种 沙星残留量的高效液相色谱方法。该方法回收率和 沙星的储备液，用流动相配制成100tLg／mL混标中 检出限都令人满意。 间液，再用流动相将混标中间液稀释成浓度为 2实验部分 0．005 2．1仪器和试剂 分析，根据峰高与相应质量浓度进行线性回归，绘 DIONEXU3000高压液相色谱仪配RF2000荧制标准曲线。 1 作者：王圣义，男，工程师，E—mail：bee35C／Mp．sina．com 2010V01．61No．8 中国蜂业 APlCULTUREOFCHINA 质虽监控33 2．4样品处理 实验比较了两种不同处理对荞麦蜂蜜杂质的去除效 l的磷酸盐缓冲 果，见图2。 2．4．1准确称取2