组织工程皮肤种子细胞生物学特性的研究.pdfVIP

西部 医学 2009年 4月 第 21卷第4期 IViedJWestChina，April2009，Vo1．21，No．4 组织工程皮肤种子细胞生物学特性的研究* 董 丽，周 沫，李宝兴 ，赵亚平，马绍英 ，李幼忱 ，张乃丽，康 悦 (中国辐射防护研究院，山西 太原 030006) 【摘要】 目的 建立一种分离培齐组织工程皮肤种子细胞 的方法，并对细胞 的生物学特性进行研究。方法 分别 通过 Dispase一胰蛋 白酶消化法和组织块法对表皮干细胞和成纤维细胞进行分离培养，利用倒置相差显微镜和扫描 电镜 等对其进行形态学观察，MTT 比色法对细胞 的增殖动态进行测定 ，免疫组化法对两种细胞进行鉴定 。结果 分离的表 皮细胞和成纤维细胞可在体外快速贴壁生长 、增殖，活力较好 ，免疫组织化学染色为 阳性 。结论 通过 Dispase一胰 蛋 白 酶消化法和组织块法分别获得的表皮干细胞和成纤维细胞在体外能够快速扩增、培养 ，可为下一步组织工程皮肤 的构 建提供充足 、可靠的细胞源。 【关键词】 组织工程 ； 表皮干细胞 ； 成纤维细胞 ； 生物学特性 【中图分类号】 R329．2 6 【文献标识码】 A 【文章编号】 1672—3511(2009)04—0553—03 Biologicalcharacteristicsofseedcelloftissueengineeredskins DONG I-i，ZHOU M O，LIBao-xing，etaf (Medic,fTissueBank，InstituteofRadiationProtectionofChina，Taiyuan030006，China) [Abstract] Objeetive Toestablishtheisolation，cultivationtechniqueofhumanskinseedcellsfortissueengineer-一 ingandstudythebiologicalcharacteristics．．Methods Theepidermalstem cellsandfibroblastwereisolatedfrom thehu— manskinbytwo—stepdigestingofdispaseandtrypsinandexplantculturemethod．Cellularmorphologieswereobserved withinvertedphasecontrastmicroscopyandscanningelectronmicroscopy,．Cellviabilitywasdetectedwith MTT．Cell typeV0aSidentifiedwith immunohistochemistry．Results Theisolatedepidermal cellsandfibroblastscouldrapidlygrow andproliferate，whichwerepoMtiveinimmunostaining．Conclusions Thehuman,skincells，includingepidermalcellsand fibroblasts．acquiredwiththemethodsmentionedabovecouldbeculturedandproliferatedrapidly invil,o．whichwould providesufficientandreliablecellsresourcesfortissueengineering,skin． [Keywords] Tissueengineering； Epidermalstem cdls； Fibroblasts； Biologicalcharacteristics 皮肤组织工程是应用组织工程学方法，利用体外 院行包皮环切术的健康儿童切除的包皮。 细胞培养技术将皮肤种子细胞接种于细胞外基质所 1．1．2 试剂 限定性表皮细胞无血清培养基 DK