大鼠脑源性神经营养因子基因克隆及其真核表达载体的构建.pdfVIP

维普资讯 匡蓥迨 盘壶 2008年3月 第29卷 第6期 · 论 著 · 大鼠脑源性神经营养因子基因克隆及 其真核表达载体的构建 邓兴力，杨智勇，董 坚 ，王廷华 ，徐 丹 ，冯忠堂 昆明医学院第一附属医院神经外科 昆明市 650032 摘要 目的 克隆大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的表达序列，构建大鼠BDNF基因真核表达载 体。方法 以RT—PCR从大鼠脑组织总RNA 中扩增 BDNFcDNA，将其克隆到真核表达载体pcDNA3中构建重 组质粒pcDNA3一BN，以限制酶酶切鉴定和 DNA序列分析鉴定重组质粒 结果 RT—PCR产物为783bp特异 片段 ，重组质粒酶切后产生783bp和5．2kb的片段 ，DNA测序证实783bp片段的碱基序列与大鼠BDNP基因序 列完全一致。结论 成功克隆大鼠BDNF基因表达序列并构建了BDNF基因真核表达栽体pcDNA3一BN。 关键词 脑源性神经营养因子基因；真核表达；重组质粒 中图分类号：R一332 文献标识码：A 文章编号：1672—3422(2008)06-0001-03 CloningofBrainDerivedNeurotrophicFactorGeneand Construction ofItsEukaryoticExpressionVector DENGXingli，YANGZhiyong，DONGJian，etal DeptD，’Neurosurgery，theFirstAffiliatedHospitalofKunming MedicalCollege，Kunming650032，China ABSTRACT 0b． iective To cloneandconstructthe eukaryoticexpressionrecombinantvector forbrainderivedneurotrophic BDNF gene． M ethods The ratBDNFcDNA wasamplifiedb RT— ( ) y PCR from ratbraintissue、Bygenerecombinationtechnique．ratBDNF cDNA wasinsertedintoeu。 karyoticexpressionvectorpcDNA3、Therecombinantplasmidwasverifiedwithrestrictionenzymedi— gestionandDNA sequencing．Results TheRT—PCR productis783bpspecificsegment．Byrestric— tionenzymedigestion．therecombinantplasmidwasdigested into783bpand5．2kb fragments．The DNA sequenceofthe783bpfragmentwasidenticalwithratBDNFcDNA inGeneBank．Condusion TheBDNFgenewascloned．andtheeukaryoticexpressionvectorforBDNFgenewasconstructedSHe— cessfully．whichwillprovidethefoundationofrthefurtherresearch． ． KEY WoRDS Brainderivedneurotrophicfactor(BDNF)；Eukaryoticexpression；Recombi— nantplasmid 脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotro— 中显示出广阔的应用前景 I。然而，BDNF属生 phicfactor，B