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第六章 分子发光分析(Molecular Luminescence Analysis ) 分子荧光和磷光分析(Molecular Fluorescence and Phosphorescence Analysis) 在一般温度下，大多数分子处在基态的最低振动能级。处于基态的分子吸收能量(电能、热能、化学能或光能等)后被激发为激发态。激发态是很不稳定的，它将很快地释放出能量又重新跃迁回基态。若分子返回基态时以发射电磁辐射(即光)的形式释放能量，就称为“发光”。 如果物质的分子吸收了光能而被激发，跃迁回基态所发射的电磁辐射，称为荧光和磷光，又称光致发光 (photoluminescence)。 一、基本原理 （一）荧光和磷光的产生 处于激发态的电子，通常以辐射跃迁方式或无辐射跃迁方式再回到基态。 辐射跃迁主要涉及到荧光、延迟荧光或磷光的发射；无辐射跃迁则是指以热的形式辐射其多余的能量，包括振动弛豫（VR）、内转换（IC）、系间窜跃（ISC）及外转换（EC）等，各种跃迁方式发生的可能性及程度，与荧光物质本身的结构及激发时的物理和化学环境等因素有关。 荧光发射（Fluorescence emission，FE ）处于激发单重态的电子经振动弛豫及内转换后到达第一激发单重态(S1)的最低振动能级(V=0)后，以辐射的形式跃迁回基态(S0)的各振动能级，这个过程为荧光发射 磷光发射（Phosphorescence Emission，PE） 电子由基态单重态激发至第一激发三重态的几率很小，因为这是禁阻跃迁。但是，由第一激发单重态的最低振动能级，有可能以系间窜跃方式转至第一激发三重态，再经过振动驰豫，转至其最低振动能级，由此激发态跃回至基态时，便发射磷光。 （二）激发光谱曲线和荧光、磷光光谱曲线 荧光和磷光均为光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，可根据它们的激发光谱曲线来确定。 绘制激发光谱曲线时，固定测量波长为荧光（或磷光）最大发射波长，然后改变激发波长，根据所测得的荧光（磷光）强度与激发光波长的关系，即可绘制激发光谱曲线。 固定激发光波长为其最大激发波长，然后测定不同的波长时所发射的荧光或磷光强度，即可绘制荧光或磷光光谱曲线。 荧光发射光谱的普遍特性： （1）Stokes位移 (stokes shift) （2）荧光发射光谱的形状与激发波长无关 （3）镜像规则 （三）荧光和分子结构的关系 分子产生荧光必须具备两个条件： ① 分子必须具有与所照射的辐射频率相适应的结构，才能吸收激发光； ② 吸收了与其本身特征频率相同的能量之后，必须具有一定的荧光量子产率。 1. 量子产率 荧光量子产率也叫荧光效率或量子效率，它表示物质发射荧光的能力，通常用下式表示： ( = 发射荧光分子数 / 激发态分子总数 2. 荧光与有机化合物的结构 （1）跃迁类型((( (跃迁是产生荧光的主要跃迁类型。 （2）共轭效应实验证明，容易实现((((激发的芳香族化合物容易发生荧光，能发生荧光的脂肪族和脂环族化合物极少（仅少数高度共轭体系化合物除外） 。 3）刚性平面结构多数具有刚性平面结构的有机分子具有强烈的荧光。 （4）取代基效应 芳香族化合物苯环上的不同取代基对该化合物的荧光强度和荧光光谱有很大的影响。 3. 金属螯合物的荧光 除过渡元素的顺磁性原子会发生线状荧光光谱外，大多数无机盐类金属离子，在溶液中只能发生无辐射跃迁，因而不产生荧光。但是，在某些情况下，金属螯合物却能产生很强的荧光，并可用于痕量金属元素分析。 （四）溶液的荧光（或磷光）强度 1. 荧光强度与溶液浓度的关系If = K c 即荧光强度与荧光物质的浓度成之正比，但这种线性关系只有在极稀的溶液中，当(lc(0.05时才成立。 对于较浓溶液，由于猝灭现象和自吸收等原因，使荧光强度和浓度不呈线性关系。随着液漕厚度的增加，弯曲情况发生在更低的浓度处。 2. 影响荧光强度的因素 ① 溶剂对荧光强度的影响----增大溶剂的极性，将使n( (*跃迁的能量增大，((((跃迁的能量降低，从而导致荧光增强。 ② 温度对荧光强度的影响-----温度上升使荧光强度下降。 ③ 溶液pH值对荧光强度的影响带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光与溶液的pH有关。 ④ 内滤光作用和自吸收现象溶液中若存在能吸收激发或荧光物质所发射光能的物质，就会使荧光减弱，这种现象称为“内滤光作用”。 3．荧光的熄灭 荧光分子与溶剂分子或其他溶质分于的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光熄灭。这些引起荧光强度降低的物质称为熄灭剂。 二、荧光分析仪 用于测量荧光的仪器由激发光源、样品池、用于选择激发光波长和荧光波长的单色器以及检测器四部分组成。 一般