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ultraviolet and visible spectrophotometry（UV-vis) 概 述 研究物质在紫外-可见光区分子吸收光谱的分析方法 第二节 紫外-可见分光光度法 一束平行单 色光通过一个 含吸光质点的 物体时，一些光子被吸收，光强就 从 I0 降到 I 。 吸光系数E (1)物理意义：指某波长时，吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。 在一定条件下，吸光系数是物质的特定常数，表明物质对某一波长光的吸收能力。同一物质，在相同条件下，对同一波长的单色光具有相同的吸光系数。因此吸光系数是定性与定量依据。 2）百分吸光系数 在一定波长时，吸光物质的浓度为1%（W / V）即1g / 100ml，厚度为1cm时的吸光度。 （4）吸光系数的测定与计算 A、准确配制一定浓度的对照品溶 液。 B、在一定波长下测定该溶液的吸 光度。 C、依下式计算： 例：氯霉素在278nm下的吸光系 数的测量。 1、用氯霉素纯品配制100ml含有 2.00mg的标准溶液。 2、以1.00cm的吸收池，在278nm 波长处测得透光率为24.3%。 3、求氯霉素的 和ε 吸光度A的加和定律 若溶液中存在两种或两种以上的吸光物，只要这些组分之间不存在相互作用，则总吸光度是各共存吸光物的吸光度之和。 吸收光谱----A～λ曲线 特征值： A 吸收峰 λmax 谷 λmin 肩峰 λsh 末端吸收 纵坐标不同：T%、E%、ε或lgε 曲线形状将改变，但保留其特征 若溶液浓度不同:则情况不一 定性依据：多数有机化合物具有吸收 光谱特征。 特征值： 定性鉴别方法： 3.对比吸收光谱一致性 安宫黄体酮（M=386.53) 例如：维生素B12的鉴别： 2005版药典规定： 特别指出： 在相同条件下，具有相同吸收光谱的物质，可能是同一物质。 若在相同条件下，两物质吸收光谱明显不同，则肯定不是同一物质。 三、 纯度检测 例：乙醇和环已烷 256nm 无吸收 苯 256nm 有吸收 药物所含杂质，常制定一个允许其存在的最高限量，超过该值，会影响疗效或引起副作用，药物就不合格 药物无吸收 选λ测 杂质有吸收 测定A值，作为A限，若被检药物AA限，则该药品不合格。 例1：肾上腺素 310nm，无吸收 肾上腺酮 310nm，有吸收 规定：肾上腺酮含量0.06% 则肾上腺素（2mg/ml的HCl溶液) 注：浓度为2mg/ml的肾上腺素 HCl溶液，要求含肾上腺酮小 于0.06% 即： 规定： 例2：碘磷： 杂质 无吸收 有吸收 纯碘磷： ，含杂质 规定：碘磷药品 四、定量分析 依据：Lambert-Beer定律 A=Ecl 注意：波长选择原则 吸收最大,干扰最小 1)为了提高测量准确度和灵敏度，应选择峰顶较平的最大吸收波长进行测量 2、应选不易受干扰的吸收峰波长进行测定。 单组分定量方法如下： 1.吸光系数法 (1)配制一定浓度的样品溶液，测量某波长下的吸光度A值 (2)查文献得吸光系数 或 或同条件下测量出 或 (3)计算样品浓度： 再求含量 例：B12的含量测定 针剂：标示量为250μg/mL,即0.250mg/mL 操作（1）取1.00mL样品配成10.00mL溶液 （2）取上述溶液盛于 1.00cm吸收池中，在361nm处测量A值为0.507。 已知B12在361nm处的 求：（1）测定液中B12 的浓度 （2）B12针剂样品中组分B12的含量 （3）求样品标示量的百分含量 解：（1）根据 已知：A=0.507 则： 吸光系数法要求： （1）A与C是一条过原点或近似过原点的直线关系 （2）要测量或能查到 或 (3)单色光 对仪器要求高 2.标准对照法 操作 3)计算： 对照法要求： 1）A与c是