GFP应用综述.docVIP

GFP荧光蛋白的应用概述 前言：源于多管水母属等海洋无脊椎动物的绿色荧光蛋白(GFP)，是一种极具应用潜力的标记物，有着极其广泛的应用前景。绿色荧光蛋白的发现具有划时代的重要意义，它不仅为当代生物学研究提供了极为实用的基本研究手段，并且在此基础上改造发展和发现了一些列荧光蛋白，扩展了应用范围。现就GFP的理化性质、荧光特性、改进和应用研究进行了综述。 主要内容： 1、GFP的具体应用： 作为转基因植物和动物的筛选标记 用于定位标记 跟踪观察微生物 发育机理研究 用于细胞筛选 用于免疫学 2、GFP在生物领域的最新应用进展： 显像技术 失踪技术 报告基因 生物光学感受器 筛选技术 抗体生产 （1）显像技术 由于荧光蛋白有多种颜色，且稳定无毒，所以荧光蛋白可是的动物体内复杂的系统结构可视化。Livet等用多种不同的颜色的荧光蛋白对神经系统进行了基因标记，使得我们能够观察到大脑的集成路线图，可以直观地看到神经细以及细胞间的相互作用。另外，荧光蛋白还可用于生物发育领域，能够形象的观察生物体的器官组织结构的变化，随着发育学研究的深入，荧光蛋白必将成为强有力的工具。 （2）失踪技术 一般的荧光染料标记的微生物，由于其生长快、分裂快，染料可在短时间内被稀释，所以不能实时准确地观察微生物侵入活体动物以及细胞的过程。近年发现，荧光蛋白可用于失踪流行性病毒对活体细胞的感染，流行性病毒可被实时监控，借助这一新技术，可以更深入地研究其感染方式。Zhao等发现用GFP标记细菌，可以详细的对细菌的入侵进行时空检测，以确定细菌特异性的感染部位以及传染源的空间位移。GFP克服了一般荧光染料所带有的缺陷，GFP必将会进一步取代一般的荧光染料，有效地帮助学术研究者观察分析细菌病毒的感染方式。 （3）报告基因 由于荧光蛋白发光团的形成不具有物种专一性，可发出荧光稳定，且不需要依赖任何辅因子或其他基质而发光，所以转入宿主细胞后的荧光蛋白基因很稳定，对多数宿主的生理无影响，是理想的报告基因。荧光蛋白作为报告基因，可显示生物体1个或多个基因的表达的状况，并可对活体细胞内的蛋白运动和细胞件间的互作进行实时荧光显像，且直观、准确。Gregor等构建了bicoid与GFP的融合蛋白，通过直接光漂白和间接对bicoid扩散常数的估测，使研究者能直接地观察到bicoid输送的实时影像，帮助研究者更好地了解bicoid成形梯度的稳定性和核动态。 （4）生物光学感受器 荧光蛋白由于其独特的光信号转导机制，适于用作细胞内的光学感受器。现在许多研究者将具有信号转导功能的分子识别位点结合到荧光蛋白上来设计成生物感受器。经研究发现，利用ＧＦＰ感受器可以检测多种分子（如核酸，激素）的表达状况，甚至可以检测活体细胞中蛋白质的构象变化，其潜在应用前景极为广阔。 Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ等构建了一种黄色荧光蛋白融合库作为单分子感受器，可以有效用于分析大肠杆菌单细胞总蛋白质和ｍＲＮＡ表达水平的关系。 （5）筛选技术 利用ＧＦＰ可显色的特点，我们可以对需要的物质就进行筛选和纯化。可用于检验玉米胚乳和胚芽提取物的筛选和纯化重组蛋白的效力。 （6）抗体的生产 Ｓｔｅｅｌａ等将新型病毒——葫芦黄发育迟缓病毒外壳蛋白植入ＧＦＰ基因，并转入农杆菌，再将农杆菌接入本生烟用于生产该病毒，然后再利用ＧＦＰ纯化的重组蛋白便可制备多克隆免疫抗体。快速灵敏的ＧＦＰ抗体生产技术在应对新型流行病毒、及时控制疫情等方面必定会发挥巨大的作用。 （7）益生菌在动物胃肠道中的动态检测 现在ＧＦＰ已经应用于饲用益生菌的动态检测，并且表现出来良好的研究和应用前景。利用ＧＦＰ失踪技术，可以直观的观察到ＧＦＰ重组菌在肠道黏膜中的定值、在局部区域的繁殖以及扩散到整个肠道的过程，是整个动态过程可视化，这对研究益生菌的益生机制提供了有力的技术。 边慧慧等首次采用带有ＧＦＰ质粒的大肠杆菌作为蛋白质指示剂，简单、直观、形象地指示了鱼类摄食后不同时间食糜蛋白在消化道内的分布状况。同时，利用ＧＦＰ还可以通过测定黏膜上皮细胞、组织的荧光强度初步估计蛋白质的消化吸收情况。采用ＧＦＰ观测营养物质在胃肠道内的流通与变化，使得抽象的营养消化与吸收变得清晰、具体。 （8）水生环境检测 人类的生产、生活活动对环境的影响逐渐增强，水的污染日益严重，污染物大多来自工业废物和污水。被污染的水对鱼体的影响表现生殖机能障碍、雄性鱼体雌性化等。人们已经将生物传感器的敏感元件来检测污染水平。研究发现可通过将ＧＦＰ基因重组到可与水中污染物发生反应的启动子中。有研究表明，ＧＦＰ作为报告基因能够被用来作为转基因有机体连续的定性生物传感器测定水中污染物的水平，并在消除酶或特异性蛋白质试验时，提供快速而有效地结果。 (9) 酶活测定 Ｍａｌｉｋ等发现利用ｅＧＦＰ作为底物，通过测定荧光强度可以测定住的胃