分子荧光法.pptVIP

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分子荧光法.ppt

三、荧光分析法的应用 有机物的荧光分析 芳香族及具有芳香结构的有机化合物在紫外光照射下大多数能产生荧光,某些弱荧光物质可与荧光剂作用生成强荧光物质。 1.油脂苯并(a)芘测定: 油样经提取、浓缩、纯化后进行荧光测定,?ex =386nm、?em=406nm。 2.尿中N1-甲基尼克酰胺的测定: 尿液经纯化、碱处理和酮缩合成为带有黄色荧光的衍生物,在酸性溶液中加热变成稳定而产生强蓝色荧光的物质,?ex =355nm、?em=430nm 。 3.1-2-甲氨基-5-氯化磺酰萘(Dansyl-Cl ,DNS-ce 丹酰氯)用于氨基酸的荧光测定: DNS-Cl是一种荧光试剂,DNS-C1能与所有的氨基酸生成具荧光的衍生物,在碱性条件下与氨基酸(肽或蛋白质)的氨基结合成带有荧光的DNS-氨基酸(DNS-肽或DNS-蛋白质) ,DNS-氨基酸在紫外光照射下呈现黄色荧光 。 无机物的荧光分析 很多金属或非金属无机离子与一些有机化合物形成有荧光的配合物,测定荧光强度可以进行定量分析。 常用的试剂: 1. 8-羟基喹啉及其衍生物:用于Al、Ga、In、Sc、La、Mg、Zn、Cd等元素的荧光测定。 2.黄酮类试剂:桑色素、黄烷醇、槲皮素 用于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ族元素的荧光测定 3.二氨基化合物:用于测定Se 核酸分子荧光探针 遗传物质的脱氧核糖酸 (DNA), 自身的荧光效率很低,一般条件下几乎检测不到DNA的荧光,因此,常选用某些荧光分子作为探针,通过探针标记分子的荧光变化来研究 DNA 与小分子及药物的作用机理,从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前,典型的荧光探针分子为溴化乙锭,此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面,已逐步使用荧光染料作为标记物来代替同位素标记,从而克服了同位素标记物产生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。 核酸分子荧光探针 遗传物质的脱氧核糖酸 (DNA), 自身的荧光效率很低,一般条件下几乎检测不到DNA的荧光,因此,常选用某些荧光分子作为探针,通过探针标记分子的荧光变化来研究 DNA 与小分子及药物的作用机理,从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前,典型的荧光探针分子为溴化乙锭,此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面,已逐步使用荧光染料作为标记物来代替同位素标记,从而克服了同位素标记物产生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。 本章小结 掌握分子荧光产生机理 掌握激发光谱和发射光谱的产生以及发射光谱特征 掌握荧光与分子结构的关系以及荧光强度的影 响因素 掌握荧光定量分析方法及荧光分光光度计 习题:2,6 1.盐桥的作用是消除( ) A.不对称电位 B.液接电位 C.接触电位 D.相间电位 2. 在实际测定溶液pH时,都用pH标准溶液来校正电极,其目的是消除何种影响( ) A.不对称电位 B.液接电位 C. 不对称电位和液接电位 D.温度 3. 玻璃电极使用前浸泡的目的是( ) A.活化电极 B.清洗电极 C.校正电极 D.检查电极性能 4.pH玻璃电极膜电位的产生是由于( ) A.电子得失 B.氢电子透过玻璃膜 C.溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中氢离子产生离子交换和扩散 D.溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中钠离子产生离子交换和扩散 5.当pH玻璃电极测量超出其使用的pH范围的溶液时,测量值将发生“酸差”和“碱差”。“酸差”和“碱差”使得测量pH值将( ) A.偏高和偏高 B.偏低和偏低 C.偏高和偏低 D.偏低和偏高 6.参比电极的作用是( ) A.保持离子强度一致 B.提供标准电极电位 C.调节适宜的pH范围 D.消除干扰 7. TISAB由________、________和________三部分组成。 8. 电化学分析中盐桥中的电解质溶液应符合的要求是________;________。 * * 主讲:郭 伟 监督电话:3029128 第十四章 分子荧光分析法 按电磁辐射的作用对象分 : 原子光谱 分子光谱 光谱法: 按电磁辐射的能级跃迁方向分 : 吸收光谱法(从基态跃迁到激发态) 发射光谱法(激发态跃迁回基态) 紫外及可见分光光度法:分子吸收光谱法 分子荧光分析法:分子发射光谱法 发光分析法 第一节 概述 物质分子吸收了一定能量后,其电子由基态跃迁至激发态,当激发态分子以辐射形式将其能量释放返回基态时

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