氨基酸的纸色谱.pptVIP

一、目的和要求 二、色谱基本原理 色谱法在有机化学中的应用 固定相与流动相 纸色谱示意图 纸色谱示意图 三、试剂和器材 1. 试剂 0.5%茚三酮溶液、各种标准氨基酸溶液 溶剂系统： 正丁醇－88％甲酸－水(15：3：2，V/V) or 正丁醇-醋酸-水（4：1：5）。 2. 器材 剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、新华一号层析滤纸（5×15cm ） 四、纸色谱实验步骤 3、展开：用250ml集气瓶中加入20ml展开剂，放置20-30min使瓶内被蒸气饱和，将滤纸悬于瓶中，当展开剂前沿到达滤纸上端1cm时，取出滤纸，划出前沿线b，自然晾干。 4、显色：喷撒显色剂（均匀喷于滤纸上）置于105℃烘箱中烘干（2-3min）此时氨基酸与显色剂作用显色。 5、测量：用铅笔画出氨基酸的显色斑点轮廓，量出斑点中心至原点中心的距离a。 6、计算、判定、下结论。 五、注意事项 展开瓶应洗净、干燥。 点样不宜过大或过小，毛细管不混用。 展开时，滤纸不硬碰内壁，样品不接触液面。 若斑点范围较大，取其中心量取垂直距离。 为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操作时带手套。 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。 六、思考题 1、那些因素可能影响氨基酸纸色谱的效果？ 2、简述色谱法在有机化学中的用途。 * * 氨基酸的纸色谱 了解色谱分离的原理及其应用。 初步学习用纸上层析法分离鉴定不同的氨基酸。 色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。 色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。 分离混合物：一些结构类似、理化性质也相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。 精制提纯化合物：有机化合物中含有少量结构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以除去杂质，得到纯品。 鉴定化合物：在条件完全一致的情况，纯粹的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。 跟踪一些化学反应进程：可以利用薄层色谱或纸色谱观察原料色点的逐步消失，以证明反应完成与否。 固定相：用于与样品发生吸附作用的固定不动的物质。如纸层析中滤纸上的吸附的水。 流动相：也称洗脱剂，在色谱过程中起到将吸附在固定相上的样品洗脱的作用。 样品的极性：一般来讲，极性越大的化合物与固定相的吸附能力越强，越不容易被洗脱；反之则越弱，越容易被洗脱。 流动相的极性：流动相极性越大，越容易将吸附在固定相上的样品洗脱；反之则越难洗脱。 结论：若样品极性越小，或流动相极性越大，样品在固定相上的移动速度则越快。 制纸层板 点样 展开 显色 1、制纸：将滤纸在短边1.5-2cm处画起始线，打点。 2、点样：用毛细管点各种液体约直径=2mm，晾干。 *