中国人群神经肌肉病致病基因的筛选及应用研究--《河北医科大学》2012年博士论文.docVIP

中国人群神经肌肉病致病基因的筛选及应用研究--《河北医科大学》2012年博士论文 遗传性骨骼肌疾病遗传方式多样，包括：常染色体显性遗传（autosomal dominant inheritance，AD）、常染色体隐性遗传（autosomalrecessive inheritance，AR）、X连锁遗传（X-linked inheritance）及散发多种遗传方式。其发病机制为：致病基因（单基因）导致其编码的骨骼肌细胞骨架蛋白、膜蛋白、基底膜蛋白缺失，胞浆蛋白缺失或功能异常，离子通道蛋白功能异常，引起肌细胞膜破坏、胞浆蛋白结构异常、代谢紊乱、细胞膜通道异常而出现肌肉无力、萎缩、强直等骨骼肌受累主要临床表现，此外可伴有脑、心、肝、骨关节、周围神经等多系统受累。遗传性骨骼肌疾病主要包括：肌营养不良、肌强直综合征、远端型肌病/肌营养不良、先天性肌病、代谢性肌病（线粒体病、糖原贮积症、脂质沉积病）等，每组疾病中又包含若干亚型（依据致病基因编码蛋白、特征性临床表现分类），因此，遗传性骨骼肌疾病是一个庞大的疾病谱。临床表现、活检骨骼肌病理分析是认识、诊断遗传性骨骼肌疾病的基础，致病基因检测是确诊疾病的重要依据。 遗传性骨骼肌疾病，以进行性加重的肌无力、肌萎缩为主要临床表现。多于儿童、青壮年起病，从肢体无力逐渐发展到生活不能自理，致残率和致死率较高，缺乏有效的治疗手段，给个人、家庭和社会带来沉重负担。明确诊断、研究其发病机制和探索有效治疗方法，是该研究领域的热点与焦点课题。伴随致病基因和编码蛋白的不断发现，预计越来越多新的疾病类型被认识。 目前遗传性骨骼肌疾病常用检查、诊断方法包括：受累肌群肌力评判、电生理、骨骼肌活检病理分析、生化检测，在此基础上行分子病理、超微病理、基因检测，骨骼肌影像作为评判受累肌群及其严重程度的可靠方法也广泛应用于临床。受累肌群的评判是临床分型的重要依据，为目的基因检测提供方向。 遗传性运动感觉周围神经病（hereditary motor and sensory neuropathy,HMSN）是最常见的遗传性周围神经病。1886年首次由Charcot、Marie和Tooth分别报道，此后被命名为Charcot-Marie-Tooth（CMT），目前广义的CMT泛指HMSN，两者通用，包括：AD、AR、X连锁及散发多种遗传方式，迄今为止至少发现30余种致病基因突变，导致其编码的髓鞘、轴索、雪旺细胞蛋白合成及功能障碍，影响髓鞘及细胞骨架完整性、轴浆运输及能量代谢，从而导致周围神经支配的肢体出现远端肌肉无力、萎缩、感觉异常。目前CMT主要诊断依据：临床表现、电生理发现、周围神经活检病理分析，基因检测是明确分型诊断的可靠方法。电生理检查依据神经传导速度将CMT分为髓鞘型、轴索型和中间型，是临床不可缺少的检查方法。部分患者临床和电生理检查仅存在运动异常，而没有感觉异常。这种纯运动受累的CMT变异型即：远端型遗传性运动神经病（distalhereditary motor neuropathy, dHMN）。由于本组疾病具有高度临床、遗传异质性，直接致病基因测序具有一定困难，近年来基因芯片技术的应用为CMT致病基因筛查、目的基因测序带来了便捷，使CMT的分型诊断越来越明了、丰富。 目前发现6000余种遗传病，其中神经遗传病占60%以上，神经遗传病的基础研究，在我国处于尚未广泛开发的处女地，中国人口众多，具有大量的神经遗传病患者，但国内对遗传性神经肌肉病的系统研究相对匮乏，开展遗传性神经肌肉病的研究，发现具有中国人自主知识产权的致病基因变异信息具有重要价值，是我国神经病学专业亟待发展的方向。 遗传性神经肌肉病，临床容易获得活检骨骼肌、周围神经标本，可以使患者生前得到病理诊断，推动了遗传性骨骼肌、周围神经疾病的研究进程。遗传性神经肌肉病是主要的单基因遗传病，在分子生物学水平致病基因测序明确诊断、基因治疗成为现实与希望。 本研究从骨骼肌、周围神经遗传资源标本库中筛选：1）dysferlinopathy患者37例；2）远端型肌病/肌营养不良患者19例；3）dHMN一家系进行临床、病理分析、致病基因测序，旨在分别对中国人上述三组疾病进行研究，得到临床、病理及分子生物学特点。第一部分Dysferlinopathy临床、病理诊断及致病基因筛选 目的：进行性肌营养不良（progressive muscular dystrophy, PMD）是以进行性加重的肌无力、肌萎缩为主要临床表现的一组遗传性骨骼肌疾病。Dysferlinopathy是常染色体隐性遗传的PMD，DYSF突变导致分布于骨骼肌、心肌细胞膜的dysferlin蛋白缺失，膜稳定性破坏，从而出现PMD临床表现——进行性加重的肌无力、肌萎缩。根据最初受累肌群分布分为：肢带