动物分子遗传育种学(第4章).ppt

* 概念：转基因动物是指通过DNA操作过程将外源基因整合在染色体基因组内并能遗传给后代的一类动物。 第三章 转基因动物育种 （自1982以来）已成功：小鼠、大鼠、兔、猪、绵羊、山羊、牛、鸡、鱼等多种转基因动物。 第一节 动物转基因技术的理论基础 染色体交换与基因转移： 联会 转座子 基因组内 转基因 （自然产生） 生物界的这些现象及其发现是转基因动物得以产生的一个基础。 物种进化与基因表达调空： 物种进化 产生多 种物种 重要基因高 的保守性 表达调空机制 相似或相同 被转基因 成功表达 生物界的这些现象及其发现是转基因动物得以产生的又一基础。 基因组研究与分子克隆： 基因组计划 遗传图 物理图 转录图 序列图 DNA重组 及克隆 转基因动物 这些技术的产生和发展是转基因动物得以产生的主要基础。 转基因的表达特征： （1）时空特异性表达 （2）可控性表达 （3）共抑制性（当转基因和内源基因存 在同源关系时，二者的表达均受到抑 制，其原因极其复杂，目前尚未完全 清楚） （4）沉默现象 原因：a.整和在不适当的部位。 b.被受体细胞识别为异己DNA 后将其甲基化而失活。 c.转基因本身构建不恰当，而 无法转录表达。 转基因动物的成功率 受精卵 （开始） … 转基因动物 子代（结束） 总成功率：阳性动物子代数 待转基因受精卵数 4 24 - 80 小鼠 2 1 0.5 1 0.5 总成功率% 15 10 10-15 5-10 5-10 整和率% 10-20 10 5 15 10 产仔率% 60 50 40 40 20 受胎率% 大鼠 图 猪 羊 牛 物种 不同动物的转基因成功率 动物转基因的技术： （1）上游技术：是指利用分子遗传学和分子生物学技术进行基因改造，载体构建，最后组装成转基因单位的一系列方法技术。 （2）中游技术： 包括外源基因导入受体细胞、胚胎移植、转基因动物的繁育建系等。 （3）下游技术： 是指转基因的整和表达情况的检测。 下游技术的检测方法： （1）在染色体和DNA水平上： a. Southern 杂交 b. PCR扩增 c. 荧光原位杂交 （2）在 mRNA水平上： a.Nouthern blot杂交 b.RT-PCR扩增 （3）在Pr水平上： Western blot杂交。 （4）表型水平上： 检测转基因动物在生长速度、抗病性、产品质量等方面与原来动物有无差异。 第二节 转基因动物的研究方法 转基因动物的常用方法： （1）显微注射法 （2）逆转录病毒法 （3）胚胎干细胞法 （4）精子载体法 显微注射法： 外源基因构建 准备受精卵 显微注射 胚胎移植 转基因检测 ??????????????????????? 优点：（1）安全（无病毒基因组序列） （2）转移率高（整合率达30%） （3）相对较短周期内可得到纯合体 缺点：（1）设备昂贵，所需技术性很强。 （2）转基因的拷贝数无法控制，通 常为多拷贝，最多可达几百个 （3）通常在插入点引起突变（重组、 缺失）造成动物生理缺陷 显微注射法： 逆转录病毒法： 逆转录病毒： 是一种整合性的单链RNA病毒。 该方法就是将外源基因重新组合在逆转录病毒载上，然后在去感染着床前或着床后的胚胎，将外源基因导入动物细胞内，是目前开展动物转基因研究中最有效的方法一。 优点:（1）整合率高。 （2）单位点、单拷贝。 （3）插入位点的克隆分析较容易。 缺点:（1）逆转录病毒容量小，转移片段一般 小于 10kb，故被转入基因通常无调 空序列。 （2）病毒基因组有可能与外源基因一起整 合到受体细胞染色体上，造成转基因 动物的污染，限制了其在商业转基因 动物中的应用。 逆转录病毒法： 胚胎干细胞法 通过显微注射法或逆转录病毒法将外源基因引入到ES细胞内，使外源基因整合到ES基因组内某一非必需基因位点上,再对 ES细胞进行筛