从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA方法的研究进展.pdfVIP

http :// 从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 方法的研究进展 高传军 金春钰 李卓 （黑龙江大学生命科学学院 哈尔滨，150080） 摘 要：本文总结了几种从聚丙烯酰胺凝胶中回收核酸样品的方法，包括直接洗脱、电洗脱、 有机溶剂沉淀、金属离子沉淀等方法，介绍了其原理和研究进展，以及回收注意事项等。其 中直接洗脱法和有机溶剂沉淀法操作简便、经济消耗少，应用广泛。 关键词：聚丙烯酰胺凝胶、DNA 回收、洗脱、沉淀 0 前言 聚丙烯酰胺凝胶是丙烯酰胺和N,N’- 甲叉双丙烯酰胺在有催化剂如过硫酸铵存在下聚合 形成的。其反应机理如下： CH2 CH CH2 CH CH2 CH CH2 CH n n O O O C O C O C O C O H NH2 NH NH2 NH H C CH C NH H C CH C NH CH NH C C CH 2 2 + 2 2 CH2 CH2 NH NH C O C O CH2 CH CH2 CH CH2 CH CH2 CH n n C O C O NH2 NH2 丙烯酰胺通过 N,N’- 甲叉双丙烯酰胺彼此交联形成平均孔径大小可调（通过调整浓度） 的网络结构，丙烯酰胺和 N,N’- 甲叉双丙烯酰胺浓度比适宜时形成的凝胶有弹性、完全透明， 较琼脂糖凝胶来说，具有机械强度大，分辨率高等优点，广泛应用于分子生物学实验中。从 聚丙烯酰胺凝胶中回收核酸样品是科研工作中经常遇到的问题，虽然有试剂盒可供选用，但 价格较贵，以下介绍的几种从聚丙烯酰胺凝胶中回收核酸样品常用的方法，不需特殊的试剂 和仪器。 1 回收 DNA 样品的一般思路 按照洗脱原理的不同，可将众多的洗脱方法归纳为两类：直接洗脱法和电洗脱法。前者 是 DNA 片段在溶剂的浸泡下自由扩散而出，后者则是利用 DNA 片段上所带电荷与电极相 吸而扩散出来。得到的 DNA 粗溶液可以直接用于后续实验，但更多的是取适量回收产物为 模板进行 PCR 操作，使 目的片段得到大量扩增。根据实验需要，可以将DNA 粗溶液纯化， 以沉淀形式分离出来，然后再溶解。概括起来，胶回收包括洗脱和沉淀两大步。 2 DNA 的洗脱 2．1 直接洗脱法