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污水中粪大肠菌群及致病菌检测操作规程
1目的
明确污水中粪大肠菌群及致病菌检测的操作规程。
2试剂
乳糖胆盐培养液
蛋白胨:20g
胆盐:5g
乳糖:5g
0.4%溴甲酚紫水溶液:2.5ml
蒸馏水:1000ml
将蛋白胨、胆盐、乳糖溶解于1000 ml蒸馏水中,调整pH7.4,加入指示剂。分装10ml每管,115℃灭菌20min.
三倍乳糖胆盐培养液
蛋白胨:60g
胆盐:15g
乳糖:15g
0.4%溴甲酚紫水溶液:7.5ml
蒸馏水:1000ml
将蛋白胨、胆盐、乳糖溶解于1000 ml蒸馏水中,调整pH7.4,加入指示剂。分装5ml每管,115℃灭菌20min.
3操作步骤
3.1污水接种样品
3.1.1污水样品(由院内负责污水处理人员负责)至少取200ml,使用前充分混匀, 接种量确定为10ml、1ml、0.1ml
3.1.2取10ml样品接种于5ml三倍乳糖胆盐培养液,共做5管
取1ml样品接种于10ml乳糖胆盐培养液,共做5管
取1ml样品加入9ml无菌蒸馏水中,再取1ml加入10ml乳糖胆盐培养液,共做5管
3.1.3培养条件:44℃、24小时
3.1.4乳糖利用的试管接种EMB平板进行粪大肠菌群的鉴定
3.1.5根据粪大肠菌群生长的试管数量查表,得出100ml污水中粪大肠菌群的MPN值。再扩大10倍得出1L污水中粪大肠菌群的数量。
3.2污水中沙门氏菌检验方法
3.2.1培养基:SC沙门氏菌增菌液SS培养基双糖铁培养基诊断血清
3.2.2操作步骤
3.2.2.1取200 ml污水,用无菌滤膜进行抽率,将滤膜放入100 mlSC液体培养基中35℃增菌培养12-24小时。
3.2.2.2接种SS平板,挑取可疑菌落接种双糖铁培养基,生化和血清学鉴定。
3.3 污水中志贺氏菌检验方法
3.3.1培养基:GN增菌液SS培养基双糖铁培养基诊断血清
3.3.2操作步骤
3.3.2.1取200 ml污水,用无菌滤膜进行抽率,将滤膜放入100 mlGN液体培养基中35℃增菌培养12-24小时。
3.3.2.2接种SS平板,挑取可疑菌落接种双糖铁培养基,生化和血清学鉴定。
4 参考文献
≤医疗机构水污染物排放标准≥ GB 18466-2005
文件名称 污水中粪大肠菌群及致病菌检测操作规程 文件编号 WZXY-JY-WSW-315 作业指导书 版本版次 B/O 页次 2/2
编制 孙林 审核 盖生久 批准 王箴环 受控状态 受 控 生效日期 2011.06.08
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