强化融合蛋白lhFⅦ-LDM对人肺腺癌细胞A549体内致瘤性的抑制.pdfVIP

2014年 9月 四川大学学报 (自然科学版) Sep． 2014 第 51卷 第 5期 JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition) V01．51 No．5 doi：103969／j．issn．0490—6756．2014．05．028 强化融合蛋 白lhFⅦ一LDM 对人肺腺癌细胞 A549体 内致瘤性的抑制 廖东升，阳 宇，陈金武，马登佼，李 灵 (四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都，610064) 摘 要 ：以人凝血 因子Ⅶ(FVII)cDNA和编码力达霉素 (LDM)辅基蛋 白LDP的质粒 (pET— VH—LDP)为模板 ，通过PCR及搭桥 PCR构建原核表达人凝血 因子Ⅶ轻链 (thelightchainof FⅦ，lhFⅦ)和 LDP融合蛋 白lhFⅦ一LDP的重组质粒 pET19b-lhFⅦ一LDP．重组质粒转化感 受态表达菌株 E．coliRosetta-gamiB (DE3)pLysS，诱导表达后亲和纯化 ，并 以Western blot鉴定得到的融合蛋 白lhFⅦ-LDP．将 lhFⅦ一LDP与 LDM 的烯二炔发色团(AE)进行分子 组装制备强化融合蛋 白药物 lhFⅦ一LDM．用免疫共沉淀 (CO—immunoprecipitation，CO—IP)检 测 lhFⅦ一LDP与人肺腺癌细胞 A549组织 因子 (TF)的结合特异性，并通过裸 鼠移植 瘤实验 研究 lhFVII—LDM 对 A549细胞体 内致瘤性的影响．结果显示，lhFVII—LDP能够与TF特异 性结合 ，并且 ，强化融合蛋 白lhFⅦ一LDM 能够显著抑制 A549细胞的体 内致瘤性． 关键词 ：凝血 因子Ⅶ轻链 (1hFVII)；LDM ；组织 因子 (TF)；A549细胞 ；体 内致瘤性 中图分类号 ：Q25 文献标识码 ：A 文章编号：0490—6756(2014)05—1029—06 TheinhibitoryeffectofenergizedfusionproteinlhFⅦ-LDM on thetumorigenicityofA549cellsinvivo LIAODong—Sheng，YANG Yu，CHEN Jin—Wu，MA Deng—Jiao，LILing (KeylaboratoryofBio—resourceandEco—environmentofMinistryofEducation，CollegeofLifeSciences， SichuanUniversity，Chengdu610064，China) Abstract：StandardandbridgePCRwereemployed，usinghumancoagulationfactorⅦ (FⅦ)eDNA and lidamycin (LDM )apoprotein LDP—codingplasmid (pET—VH-LDP)astemplates，to constructthere— combinantplasmidpET19b—lhFⅦ一LDP forprokaryoticproductionforthefusionproteinlhFVII—LDP， whichcontainshumancoagulationfactorⅦ lightchain (1ightchainofFⅦ ，lhF Ⅶ)atN—terminaland LDP domainatC-termina1．Therecombinantplasm idwastransformedinto competentE． coliRosetta— gamiB(DE3)pLysS．Therecombinantproteinwasinducedandpurifiedbyaffinitychromatography，fol一 1owedbyaconfirmatio