155-炎可宁片微生物限度方法验证.docVIP

炎可宁片微生物限度检查方法验证记录 品名：炎可宁片 验证日期：2013.05.14 规格：0,45g/片 报告日期：2013.05.30 验证依据：《中国药典》2010年版一部 操 作 人： 耿敏 复 核 人：张泽军 一、菌种：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B)63501]、 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )[CMCC(B) 26003]、 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(F) 44102]、 白色念珠菌(Candida a lbicans )[CMCC(F ) 98001]、 黑曲霉菌(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]，均为第2代，由四川省药检所提供。 二、菌液制备： 1．取经32.5℃培养24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌肉汤培养物1ml加9ml0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-6，为50～100/ml菌悬液,做活菌计数备用. 2. 取经25.0℃ 培养24小时的白色念珠菌液体培养物1ml加9 ml0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-6,为50～100/ml菌悬液,做活菌计数备用。 3．取经25.0℃ 培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出孢子悬液于无菌试管中，取1ml菌液加含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液9ml， 10倍稀释制成含孢子50～100/ ml的孢子悬液，做活菌计数备用。 三、供试液制备 称取供试品10g，加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，混匀，为1：10供试液，分别人工污染上述5种试验菌株。 四、验证试验 1. 平皿法： ?1) 试验组：取1：10供试液1 ml和1 ml 试验菌株同时加入平皿中，细菌倾注琼脂培养基，霉菌倾注玫瑰红钠培养基，待凝固后，细菌置32.5℃培养3天，霉菌置25.0℃培养5天，观察结果。 ?2) 活菌组：取上述制备的菌悬液1ml加入平皿，测定加入的试验菌菌数。 ?3) 供试品对照组：取供试液1ml加入平皿，测定供试品本底菌数。 ?4) 稀释剂对照组:考察供试液制备过程中微生物受影响的程度，用相应的稀释液1ml代替供试液，加入试验菌1ml，测定菌落数。 试验组回收率测定结果 阳性菌 样品 批号 活菌组菌落数 试验组菌落数 供试品对照 组菌落数 回收率％ 1# 2# 1# 2# 1# 2# 大肠埃希菌 130501 78 82 15 11 0 0 16.2 130502 86 81 21 16 0 0 22.2 130503 84 78 13 18 0 0 19.1 枯草芽孢杆菌 130501 82 75 14 15 0 0 18.5 130502 76 77 11 17 0 0 18.3 130503 84 79 19 14 0 0 20.2 金黄色葡萄球菌 130501 74 79 11 12 0 0 15.0 130502 86 86 18 15 0 0 19.2 130503 63 69 12 5 0 0 12.9 白色念珠菌 130501 56 58 15 8 0 0 20.2 130502 64 70 8 22 0 0 22.4 130503 63 68 9 14 0 0 17.6 黑曲霉菌 130501 62 56 12 7 0 0 16.1 130502 68 61 9 6 0 0 11.6 130503 65 66 12 5 0 0 13.0 回收率＝ （试验组平均菌落数－供试品对照组平均菌落数）/活菌组平均菌落数×100% 稀释剂对照组回收率测定结果 阳性菌 样品 批号 活菌组菌落数 稀释剂对照组菌落数 回收率％ 1# 2# 1# 2# 大肠埃希菌 130501 78 82 62 65 79.38 130502 86 81 65 72 82.04 130503 84 78 67 69 83.95 枯草芽孢杆菌 130501 82 75 72 66 87.90 130502 76 77 69 75 94.12 130503 84 79 74 73 90.18 金黄色葡萄球菌 130501 74 79 72 63 88.24 130502 86 86 62 69 76.16