GB/T 18932.21-2003蜂蜜中氯霉素残留量的测定方法　酶联免疫法.pdf

GB/T18932.21-2003 月U 青 GB/T18932的本部分的附录A为资料性附录。 本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本部分主要起草人:庞国芳、付宝莲、张进杰、肖艳霞 本部分系首次发布的国家标准。 GB/T 18932.21-2003 蜂蜜中氯霉素残留量的测定方法 酶联免疫法 范围 GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中氯霉素残留量酶联免疫测定方法。 本部分适用于蜂蜜中氯霉素残留量的测定。 本部分的方法检出限:氯霉素为。.30kg/kg, 2 规范性 引用文件 下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注明日期的引用 文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达 成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于 本部分 。 GB/T6379 测试方法的精密度 通过实验室间试验确定标准测试方法的重现性和再现性 (GB/T6379-1986,neqISO5725;1981) GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 (GB/T6682-1992,neqISO3696:1987) 3 原理 试样中残留的氯霉素与试剂盒中的氯霉素酶标记物共同竞争氯霉素抗体，形成有酶标记或无酶标 记的抗原抗体复合物而被吸附于微孔板底。用酶标仪在450nm处测定吸光度，根据吸光度值得出样 品中氯霉素的残留量 。 试荆和材料 4.1 氮霉素试剂盒 4.1.1 96孔板:12条X8孔。 4.1.2 氯霉素标准溶液 4.1.3 氯霉素酶标记物溶液。 4.1.4 氯霉素抗体溶液。 4.1.5 酶基质。 4.1.6 发色剂。 4.1.7 反应停止液。 4.1.8 缓冲溶液。 4.2 乙酸 乙醋 分析纯，重蒸馏。 4.3 水 GB/T6682规定的一级水 。 5 仪器 5.1 酶标仪。 GB/T18932之1-2003 2 5 . 洗板机:配8道或 12道洗头。 5 3 . 8道移液器:501}L-300fL, 4 5 . 单道移液器:5yL-50pL,100,1L-1000pL和2mL-10mL, 5 5 . 离心机 。 6 5 氮气吹干仪。 5 7 10mL具塞试管。 8 5 液体混匀器。 9 5 . 振荡器 。 6 试样制备与保存 6.1 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的实验室样品，在密闭的情况下，置于不超过 60℃的水浴中温热、振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样 置于样品瓶中，密封，并加以标识 6.2 试样的保存 将样品于室温下保存。 分析步骤 7 1 提取 称取2g试样，精确到 。.01g，置于25mL具塞离心管中，加人4mL水和4mL乙酸乙酷(4.2)，在 液体混匀器上充分混匀2min，使试样完全溶解。在振荡器上振荡10min，以4000r/min离心10mine 准确吸取上层乙酸乙酷 1mL于10mL具塞试管(5.7)中，用氮气吹干仪在50℃吹干。加人 。.5mL缓 冲溶液((4.1.8)溶解残渣，供酶标仪测定。此溶液含试样量。.5g,稀释系数为to 7.2 测定条件 以下所有操作应在20`C-24℃室温下进行 7.2.1 酶标仪测定条件:酶标仪测定波长为450nm, 7.2.2 洗板条件如下: 7.2.2.1洗板机洗板条件:采用条式抽干和注满，洗涤次数八次，每次注水量为250pL -350pL, 7.2.2.2 人工洗板条件:洗涤次数五次以上，每次注水量为250pL, 7.2.3 氯霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(200C-241C)后方可使用。氯霉素标准溶液 (4.1.2),氯霉素酶标记物溶液((4.1.3)和氯霉素抗体溶液((4.1.4)等均按 1