多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究.pdfVIP

536 CHINATROPICALMEDICINEVo1．11No．5May2011 中国热带医学2011年第 11卷第5期 论 著 多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究 何英，吴正林，吴润香，杨来智，王琼，陆学东 摘要：目的 建立一种快速、特异的可同时检测血 中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。 方法 参照各 病毒特异性核酸序列，按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物，以核酸测序确证扩增产物，用标准病毒株及临床阳 性血清样本DNA、RNA为模板优化 PCR反应体系和反应条件 ，建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建 立的多重检测方法对 120例AITJ升高的血清标本进行多重检测，并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。 结果 采用多重PCR技术可同时对EBV、，ITIV、HBV、HSV4种DNA病毒进行扩增；采用多重RT—PCR技术可同时对 Cox～V、HEV、HCV3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一，无非特异性扩增条带，片段长 度与理论值一致；核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基 因片段。临床标本检测多重感染率为 19．2％，与单一检 测结果一致。 结论 建立的多重PCR检测方法稳定可靠，敏感度、特异度好，适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊 断与临床筛查。 关键词 ：病毒性肝炎相关病毒 ；多重聚合酶链反应；临床实验室诊断技术 中图分类号：R512．6 文献标识码：A 文章编号：1009—9727(2011)5-536—04 DevelopmentofmultiplexPCR assayforhepatitis—associatedviralinfection．HE Ying，WU Zheng-lin。WU Run xiang，eta1．(DepartmentofMedicalLaboratory，FutianPeoplesHospital，AffiliatedtoGuangdongMedicalCollege，Shenzhen 518033，Guangdong，P．R．China) Abstract：Aim TodevelopamultiplexPCRmethodtosimultaneouslydetectdfiferenthepatitis-associatedvirusesin human ~erum． Methods Specificprimerstargetinghepatitis—associatedviruseswere designedaccording tospecific DNA sequencesandrequirementsofdesigningmultiplexPCR primer．Thereactionsystem andconditionsofmultiplexPCR were optimizedbydetectingDNA orRNA ofstandardvirusstrainsorclinicalstrains．Thespecificity and sensitivityof multiplexPCR werevalidated．SubsequentlytheestablishedmuhiplexPCR methodswere appliedtothedetect120clinical sel31m sampleswithabnormallyelevatedserum ALTlevels．Th edetectionresultswerecomparedwiht thoseofuniplexPCR． Results Thehepatitis-associatedviursesofHBV，EBV，1W andHSV wereabletobesimultaneouslydetectedbyhte developedmultiplexPCRmethod，andHEV，HCV aswell