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表达猪源链球菌类MMRP融合蛋白基因工程菌的构建及免疫保护试验.pdf
业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 ():
·研究论文·
表达猪源链球菌类M-MRP 融合蛋白基因
工程菌的构建及免疫保护试验
红结 陆承平**
(南京农业大学 业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京 2 10095)
摘要：利用PCR 技术，分别扩增马链球菌兽疫亚种( subsp. ) ATCC35246 株类M 基因
583~1063位碱基和猪链球菌( )2 型HA9801 株 基因298~827 位碱基的片段。通过在类M 基因片段的3 端和mrp 基
因片段的5 端引物添加共同的 酶切位点，利用T4 连接酶连接，克隆至pET-32a (+) 载体。将重组质粒转化大肠杆菌
经 。通过
( ) BL21 ， IPTG 诱导，可获得分子量约为60 kD 的融合蛋白 MRP 和类M 蛋白的多克隆抗体进行
ELISA 反应和免疫印迹分析表明：表达的融合蛋白同时具有类M 蛋白和MRP 的抗原性。用组氨酸亲和层析柱纯化重组融合
蛋白，以该蛋白和链球菌的全菌二联灭活疫苗分别免疫仔猪 10 头，重组蛋白的免疫保护率达60 。
关键词：类M 基因； 基因；基因融合；表达
Construction of Recombinant Strain Expressing M-like-MRP Fusion Protein of
from Pig and Immonoprotection Protection Test
FAN Hong-Jie LU Cheng-Ping
The 480 bp fragment of M-like gene and 529 bp fragment of gene were amplified from the genomic DNA of Streptococcus equi
subsp. ATCC35246 strain and 2 HA9801 respectively by PCR .These two gene fragments were fused by T4 ligarase and
then the fusion gene was cloned into pET-32a(+) in the proper orientation via restriction endonucleases H and d 芋.The recombinant plasmid
was verified by restriction endonuclease analysis, nucleotide sequencing , and double PCR, then transformed into its host strain BL21 .
The fusion gene encoded the recombinant fusion protein with 339 amino acid re
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