Akt3基因在低氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞体外增殖中的作用.pdfVIP

重庆医学2008年 11月第 37卷第 22期 2553 · 论 著 · Akt3基因在低氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞体外增殖中的作用 易 斌 ，钱桂生，白 莉△，王关 嵩 (第三军 医大学新桥 医院全军呼吸研究所 ，重庆 400037) 摘 要 ：目的 通过观察缺氧致大 鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)丝氨酸／苏氨酸蛋 白激酶 3(Akt3)mRNA及其蛋 白表达水 平变化与低氧PASMC增殖的关系，探讨 Akt3在低氧肺血管重建q-的调控作用。方法 组织块法培养 PASMC。采用半定量 RT—PCR技术检测常氧组 (N组)和低氧 2、8、12、24h组Akt3基因mRNA表达水平；采用Westernblot技术检测相应蛋 白表达水 平。采用 MTT法 、。H—TdR掺入法检测 PASMCs增殖改变。结果 低氧诱导 PASMCs不断增殖。各组均检测 出Akt3基 因 mRNA 以及蛋 白表达变化，图像定量分析光密度值显示各组表达mRNA 以及蛋 白表达与细胞增殖改变密切相关。结论 Akt3 基 因可能在低氧肺动脉高压 中调节PASMC增殖。 关键词 ：平滑肌细胞 ；丝氨酸 ／苏氨酸蛋 白激酶 ；缺氧肺动脉高压 中图分类号：R365．563 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—8348(2008)222553—03 TheroleofAkt3geneinpulmonaryarterialsmoothmusclecellin vitroamplication inducedbyhypoxiainrats YIBin，QIAN Gui—sheng，BAILi ，eta1． (InstituteofRespiratoryDiseases，XinqiaoHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037，China) Abstract．．Objective ToobservethechangesofAkt3mRNAandproteinexpressive1evelinpulmonaryarterialsmoothmuscle cells(PASMC)inducedbyhypoxiainrats，andtoinvestigatetheregulatoryroleofAkt3signalingpathwayinhypoxia—inducedpul— monaryvascularremodeling．Methods ToestablishthepurePASMCsculturesystem bytissue-stickingmethod．Semi—quantitative reversetranscriptionandpolymerasechainreaction (RT-PCR)wereusedtoexaminetheAkt3mRNA expressionafterPASMCs wereexposedtohypoxiafor2h，8h，12hand24hrespectively．AndPTEN proteinexpressionsweredeterminedbyW esternblotting． ThechangesofPASMCsproliferationweredeterminedbyMTT and。H—TdR incorporatedway．Results Hypoxiacouldstimulate PASMCstoproliferateuninterrupted1y．ThemRNA andproteinofAkt3couldbedetectedinallgroups，andtheexpression levelof mRNA andproteinwerecloselyassociatedwithPASMCsproliferation．Conclusion Akt3signalingpathwaymayplayanimportant roleinregulatingPASMCproliferation inhypoxia—inducedpulmonaryhype