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人类诱导的多能干细胞(iPS细胞)技术
高级培训班
中国科学院细胞库/干细胞库
20010年4月
目录
人类胚胎干细胞培养方法 3-35
人类成纤维细胞的培养 36
慢病毒包装与感染 37-39
人类iPS 细胞的诱导 40
常用材料 42
Human Embryonic Stem Cells: Laboratory Manual
Content: 1. General: 1.1 Required equipment.
1.2 Required materials.
1.3 Gelatin coating of plates
1.4 Preparation of Pasteur pipettes
1.5 Preparation of Freezing solution.
2. Mouse embryonic fibroblasts (MEF): 2.1 MEF medium.
2.2 Derivation of MEF from pregnant mice.
2.3 MEF splitting.
2.4 MEF freezing.
2.5 MEF thawing.
2.6 Preparation of MEF-covered plates.
3. Human foreskin fibroblasts (HFF):
3.1 HFF medium.
3.2 Derivation of HFF from foreskins.
2.3 HFF splitting.
2.4 HFF freezing.
2.5 HFF thawing.
2.6 Preparation of HFF-covered plates.
4. Human embryonic stem cells (hES): 4.1 hES cell media:
4.1.1 Normal medium.
4.1.2 Serum- free medium.
4.2 hES cell splitting.
4.3 hES cell freezing.
4.4 hES cell thawing.
4.5 Formation of EBs.
4.6 Formation of teratomas.
4.7 Transfection.
4.8 Mini MACS sorting.
5. Abbreviations
1. General: 1.1 Required Equipment: 1. Class 2 Bio-Safety cabinets.
2. 37 (C Incubators with 5% CO2. 3. Inverted Phase -Contrast Microscope. 4. Table Centrifuge, preferably with an option for 4 (C. 5. Liquid Nitrogen storage container.
6. Autoclave and oven for sterilization.
7. 500ml autoclaveable glass bottle.
8. Culture dishes Nunc dishes recommended for hES cell culturing.
9. Pasteur pipettes.
10. Autoclaveable cylinders for Pasteur pipettes.
11. Petri dishes.
12. Watchmakers forceps (recomemended Dumont 5, Fine Scientific Tolls).
13. Sharp Iris scissors.
14. T75 culture flasks.
15. Nalgene freezing box. C.N.5100-0001.
16. 40?m MESH strainer
17. Glass slides
1.2 Required Materials:
1. Sterile water. Recommended Sigma W-3500.
2. Gelatin powder. Recommended type A, from porcine, Sigma G-1890.
3. Dulbecco’s Modified Eagle
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