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376 蚕业科学 CANYEKEXUE 2004；30(4) 6×His．猪生长激素融合基因在家蚕生物反应器中的表达 朱江1姜秀英2曹广力1朱艳1 彭建明1李新平1沈颂东1 贡成良3 (1苏州大学生命科学学院，苏州215006；2江苏徐州医药学校； 3苏州大学农业科学与技术学院) 电泳带的25 性条带大小约为25kD。 关键词 猪生长激素 融合基因 家蚕生物反应器表达 中图分类号078$881．2文献标识码B 文章编号0257—4799(2004)04—0376—06 上海细胞与生物化学研究所吴祥甫教授馈赠，本学 猪生长激素(porcinegrowthhormone，oGH)是由 猪脑垂体分泌的一种多肽激素。pGH可促进蛋白质 院生物化学与分子生物学实验室保存。 和脂肪动用，显著提高猪的生长速度、饲料报酬和瘦 1．1．2家蚕品种皓月×菁松，由苏州大学农业科 肉率，是畜牧业生产中极其重要的激素之一…1。目 学与技术学院蚕桑系提供。 前，许多学者已通过DNA重组技术在大肠杆菌原核 1．1．3 工具酶和试剂 限制性内切酶、Taq酶、 表达系统[2,3]、鼠胚胎成纤维细胞14J和杆状病毒表达 vector 载体系统(baeulovimsexpressionsystem，BEVS)[5,6] 2000+15 对pgh基因进行了表达。上世纪90年代日本曾有 用家蚕杆状病毒表达载体系统表达pGH的报道【7]，fectin)、低熔点琼脂糖(asarose 但国内迄今未有用这一系统表达pGH的报道。本 研究在原核表达的基础上(作者等，另文发表)，进 一步利用pBac—PAKHis和Bm．BacPAK6表达系统在 家蚕生物反应器中表达了重组猪生长激素。 1材料与方法 GC．3’)；兔抗猪生长激素抗体由本实验室自制；金黄 1．1实验材料 盒为武汉博士德生物工程有限公司产品；牛血清白 1．1．1质粒、菌株、病毒和细胞株带有猪生长激 素cDNA的质粒pWHl01由中国农业大学生物学院 Amresco公司。 齐顺章教授馈赠，以此构建的pPGH010由本实验室 1．2方法 保存…8，受体菌TGl、BmNPV、BmN细胞由本学院生 物化学与分子生物学实验室保存。转移质粒pBac． PAK．Hisl和线性化病毒Bm．BacPAK6由中国科学院 8．0TE 等【9 缓冲液平衡、洗脱，收集第一峰洗脱液。 收稿日期-2004—05—25 1．2．2感受态细胞的制备、连接产物的转化、重组 资助项目：江苏省教育厅自然科学基金项目(编号Q1114020)。 作者简介：朱江(1舛5一)，男(汉)，江苏，教授。 ‘rel：0512E—mail：Zhujiang@suda．edu．cn 万方数据 第4期 朱江等：6×His-猪生长激素融合基因在家蚕生物反应器中的表达 377 ℃培养，TC．100培养基内添加10％胎牛血清。使用接种5肛，96h后收集病蚕和病蛹，加入5×PBs(0． 25 20 000 cm2和80 g／L)、0．1％苯基硫脲，匀浆后8r／rain离心， cm2(Coming公司)培养瓶培养的