miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响.pdfVIP

塞至屋笠业曼：!堑垄厶结墅擅塑照虫的麦鲨丛基盟箜题疸塑照生物堂鱼盘笪墅喧蓥!魈 ·1453· miR一126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响 宋军民 杨 超 常远 夏坤锟 王朝杰1 (郑州大学第一附属医院肛肠外科，河南 郑州450050) 【摘要] h,48 系进行体外实验显示miR一126可以抑制SW480细胞的增殖，转染组与空白对照组12h、24 显抑制结肠癌细胞的发生发展，影响结肠癌细胞的生物学行为。 [关键词】miR-126；结肠癌；生物学功能 1005-9202．2015．06．007 (中图分类号]11735(文献标识码】A [文章编号】1005-9202,(2015)06-1453-03；doi：10．3969／j．ism miRNA 结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤¨J，但 备按照All-in-one qRT-PCR RNA A Mix 是关于结肠癌迁移与侵袭的机制目前认识尚有限。近来，越来 2帖，polypolymerase(2．5U／一，l“)，RTase 1斗l， 越多的研究支持miRNAs与肿瘤相关旧，1。有研究发现micro 5×反应缓冲液5出，加H：0至终体积25“。反应条件：37．5℃ 90 (miR)一126在不同结肠癌细胞株中转染前后表达水平不同，提rain，80℃5min，25。C保存。实施定量PCR的反应体系同样 示miR一126有可能与结肠癌有一定关系。本文通过稳定表达 miRNA 按照AU-in-oneqRT-PCR miR一126的结肠癌细胞系了解miR．126的表达及其对结肠癌细 条件：预期变性90℃10rain，90℃10S，退火60℃30s。 胞生物学行为的影响。 1．3．3 引物，同时引入CLai、MLui酶切位点及引物的序列及末端的保 1材料与方法 1．1一般资料收集2013年1月至2014年1月在我院肿瘤 科确诊为结肠癌并且行手术治疗的患者80例，每例患者术前 扩增的片段长度为357bp。以正常黏膜组织基因组DNA为模 均未进行放化疗。男46例，女34例，年龄38～55[平均(47．0± 2．5)]岁；高分化14例，中分化5l例，低分化15例；Dukes分 侧翼序列的DNA片段，将扩增后片段利用2％琼脂糖进行凝胶 期：A期12例，B期22例，C期3l例，D期15例；有淋巴结转移 电泳直至没有出现杂质带，然后对PER产物纯化回收。由 38例，无淋巴结转移42例。所有组织于离体15min内置于液 氮罐中保存。 化，于无菌操作台中挑选单个克隆放人培养基中并摇菌过夜， 1．2细胞系、载体及试剂人结肠癌细胞系SW480、人胚肾细 对目的片段经PCR鉴定正确的菌液进行质粒提取制备小量质 胞株(HEK293T)。慢病毒表达载体pGIPZ、慢病