一种快捷有效的构建cDNA文库的方法.pdfVIP

贵 州 科 学 27 (3 ) : 7 1 - 75 , 2009 Gu izhou S cience 一种快捷有效的构建 cDNA 文库的方法 1 2 1 1 1 徐远峰 　黄文峰 　高艳梅 　翟金玲 　黄 　惜 (1 海南大学 　农学院　生物科学技术研究所 ,海南 　海 口　570228; 2 中国热带农业科学院 　橡胶栽培研究所 ,海南 　儋州 　 57 1737) 摘 　要 　构建 cDNA 文库是研究基因组功能基因一种有效的手段 ,传统的建库方法通常需要在双链 cDNA 两端分别加上带限 制性酶切位点的接头序列 ,通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端 ,然后与质粒连接构成文库 。本文介绍一种简单而且不 ( ) 需要核酸内切酶的构建 cDNA 文库的方法 。该方法的主要步骤包括 : 1 通过反转录合成 cDNA 第一条链 ,通过置换底物的方 ( ) 式在 cDNA 3 ’末端合成接头序列 。 2 利用 cDNA 两端的接头引物 ,通过 Taq DNA 合成酶 PCR 扩增合成 cDNA 第二条链 。 ( ) ( ) 3 将 PCR 产生的双链 cDNA 直接与 T - 载体连接 。 4 将连接物转化大肠杆菌 ,得到 cDNA 文库 。利用本方法 ,我们成功构 建红树植物红海榄的 cDNA 文库 。PCR 结果显示插入的片段分布在 0. 5 ～3. 0 kb 之间 , 大部分 cDNA 的长度在 500 ～1000bp 之间 ,表明 cDNA 具有较好的完整性 。本方法具有操作简单 、高效率 、低成本 、RNA 模板需要量少的特点 ,而且适用于任何高 等生物 RNA 样品。 关键词 　红海榄 , cDNA 文库 , T - 载体 ( ) 中图分类号　O641. 3　　　文献标识码 　A　　　文章编号　1003 - 6563 2009 03 - 0071 - 05 A Rap id and Eff ic ien t M ethod for Con struction of cD NA L ibrary 1 2 1 1 1 XU Y UA N - feng 　HUA NG W en - feng 　GAO Y an - m e i 　ZHA I J in - ling 　HUA NG X i 1 2 ( Ins titu te of B iolog ica l S cience and Technology, H a inan Un ivers ity, H a ikou 570228, Ch ina; Ins titu te of R ubber Tree Cu ltu re, Ch inese A cadem y of Trop ica l A g ricu ltu ra l S cience, D anzhou 57 1737, Ch ina) A b stract:Con structi