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准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白的免疫检测和抗冻活性分析.pdf
业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14 (6): 865~869
·研究论文·
准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白的免疫检测和抗冻活性分析*
娜, 赵 干, 张富春, 马 纪**
(新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室，新疆生物资源基因工程重点实验室, 乌鲁木齐830046)
：
摘要 利用克隆的新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲( )抗冻蛋白基因 的全长序列
设计PCR 引物，构建原核表达质粒pMALp2x- ，以麦芽糖融合蛋白(MBP ）方式在大肠杆菌( ）TB1 中进
，经 。 ，
行表达 Amylose 树脂亲和层析纯化获得了较高纯度的MBP-MpAFP5 融合蛋白 Western blot 结果证明 MBP-MpAFP5 融
合蛋白在大肠杆菌中得到特异性的正确表达。细菌抗冻实验结果表明，导入 基因的大肠杆菌经诱导表达在低温处理
时抗冻能力无显著提高，而外加纯化的MBP-MpAFP5 融合抗冻蛋白对细菌有明显保护作用，并随浓度升高而保护作用增强。
： ；抗冻活性
关键词 准噶尔小胸鳖甲；抗冻蛋白；原核表达；免疫检测
中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 1006-1304(2006)06-0865-05
: : :
Immunoassay and Antifreeze Detection Activity of
Fusion Antifreeze Protein Expressed in
XUE Na, ZHAO Gan, ZHANG Fu-chun, MA Ji**
Insect antifreeze protein gene from was cloned into pMALp2x vector
and expressed in (TB 1) as a fusion form of Maltase-binding protein (MBP-MpAFP5) induced by IPTG. The fusion
antifreeze protein was purified according to MBP-protein purification system.Western-blotting analysis showed that the
MBP-MpAFP5 fusion protein was expressed successfully. The biological activity of this fusion antifreeze protein was measured by the
relative survival rate of bacteria at low temperature. Results showed that the MpAFP5 expressed within bacteria no significant
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