哺乳动物中MicroRNA检测方法研究进展.pdfVIP

综 遵·Review 2013年第49卷第11期 Papers 李 真，金晓露，刘红云，刘建新’ (浙江大学奶业科学研究，浙江杭州310058) 摘 的作用。科学家们采用不同方法已在动物体内检测到了超过1万条miRNA序列。Northern blotting曾被用作检测 miRNA的金标准，但因其敏感性低、操作复杂等缺点，已为新方法所取代。目前的检测方法有以杂交技术为基础 者，如生物化学发光技术、电化学法、表面增强拉曼光谱技术、生物发光共振能量转移技术、荧光相关谱技术和 生物化学发光蛋白结合技术等；又有以分析miRNA表达谱为基础的高通量检测技术，如芯片技术、新一代测序 技术、微珠杂交技术、miRAGE、纳米读数技术等。本文总结了已有的鉴定哺乳动物miRNA的技术及其优缺点，并 展望了今后的发展方向以及新的挑战。 关键词：miRNA检测；克隆技术；杂交技术；表达谱 中图分类号：$813．3 文献标识码：A 中加工而来，这些具有茎环结构的RNA中包含多个 MicroRNA(miRNA)是一类非编码的小RNA分 子，能在转录后抑制翻译或使mRNA降解，从而起到 调控基因表达的作用。最早发现miRNA可追溯到 Drosha 1993年，Ambros实验室在研究隐秀丽线虫发育信号RNA内切酶剪切成长约60bp的具有茎环结 转导通路中偶然发现了双链RNA的小分子【1】。但2001 年之前，miRNA的重要作用未得到人们的足够重视。Exportin 但近十多年来的研究表明miRNA在生理发育、疾病进入细胞质后。即被DicerRNA内切酶剪切成两条， 发生等过程中都起到调控因子的作用。这些miRNA一条为成熟体miRNA，另一条的作用目前还不明了。 可通过控制某个发育开关或组织特异性基因的表 成熟体miRNA且II可与靶基因结合调控下游基因的表 达，调控一个或多个关键靶mRNA。 达。miRNA广泛存在于各种动、植物中，参与多种重 在miRNA研究中。其检测方法至关重要。目前常要的生命活动。 用于检测miRNA的方法主要分单个miRNA的检测和 2 早期检测miRNA的方法 表达谱分析。同时又根据不同的检测载体分为固相 检测和液相检测．选择不同的检测方法会影响实验 与在生物学领域发现基因一样。第一条miRNA 的效率和研究结果。因此，本文就目前常用的miRNA 检测方法进行综述，总结其研究进展及优缺点，并展 析缺陷细胞系的隐秀丽线虫突变体中发现。由一个 望了今后的发展方向以及面临的挑战等。 4。lin一4RNA分子具有2个形态，一个分子较大约有 1 miP3qA简介 60nt，带有一个茎环结构；另一个RNA分子较小(约 miRNA是一类短链RNA分子。平均长度为22tat。 22nt)，是大分子上茎臂上的一部分，可通过与旒一 14的3’UTR不完全匹配而抑制lin一14基因的表达。 miRNA能与mRNA的3’末端非翻译区(3’UTR)结合， 直接剪切mRNA或间接抑制蛋白质翻译。从而调控 基因的表达。miRNA是从具有茎环结构的RNA分子 7。该分子的发现使miRNA的研究出现了跳跃式发 收稿日期：2012—10—15：修回日期：2012—11一09 展。不同于lin一4、let一7在不同的物种中均有发现，说 资助项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)(