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中国畜牧兽医 2008年第 35卷第 11期 生物技术 ·35 ·
赤羽病毒单克隆抗体的研制及鉴定
杨素 。,陈博文 ,沙才华 ,廖秀云 ,秦爱建。
(1.珠海出入境检验检疫局,珠海 519015;2.扬州大学兽医学院,扬州 225009)
摘要 :用纯化 的赤羽病毒 (akabanevirus,AKAV)免疫 Balb/c小 鼠,取小 鼠脾细胞 和骨髓瘤细胞 SP2/O融合 ,经间接
ELISA筛选和 3次有限稀释法克隆,得到 2株能稳定分泌抗赤羽病毒单克隆抗体 (MeAb)的杂交瘤细胞株 ,分别命名为
AKAVMcAb3A株和 2C株。ELISA试验和中和试验结果表明,本研究制备的2株McAb均具有 良好的特异性 ,为 AKAV
阳性,杂交瘤细胞培养上清液抗体 的效价分别为 1:640和 1:320,腹水的效价分别为 1:256000和 1:128000,亲和常数
(Ka)分别为 1.16×10 和6.31×10一 mol/L,3A株 的相对亲和力大于2C株 ,具有病毒 中和活性,中和效价分别为 1:64和
1:32,其 IgG亚类为 IgGl,轻链 的亚型均为 kappa型,2株细胞冻存 3次复苏后仍能稳定分泌抗体 ,表 明AKAVMcAb制备
成功 ,为赤羽病快速诊断方法 的研究奠定了基础 。
关键词 :赤羽病 ;赤羽病毒 ;单克隆抗体 ;制备 ;鉴定
中图分类号 :Q78 文献标识码 :A 文章编号 :1671—7236(2008)ll一0035—05
赤羽病 (akabanedisease)也称阿卡斑病 ,是 由 传统的赤羽病毒的分离与 中和试验操作复杂、
赤羽病毒 (akabanevirus,AKAV)引起的牛、羊等动 耗时较长,目前国内外均以常规的ELISA作为主要
物流产 、早产 、胎儿畸形 、死胎及先天性关节弯 曲一 的检测方法 ,单克隆抗体 (monoclonalantibody,
积水性无脑综合征的一种虫媒性传染病 。赤羽病是 MeAb)是建立 ELISA试剂盒和胶体金试纸条等快
世界动物卫生组织 (OIE)法定通报性疾病和中国进 速检测方法的基础 ,而国内则 尚未见有关赤羽病毒
境动物二类传染病,被列入 了中国进 口动物 的检疫 单克隆抗体研制的报道 。本研究研制了赤羽病单克
条款中(于大海等 ,1997)。20世纪 30年代 ,赤羽病 隆抗体 ,可满足当前中国进 口动物赤羽病检疫工作
在澳大利亚羊群中首次暴发 ,而后 1949年在 日本也 的大批量 、快速 的要求 ,对赤羽病快速诊断方法的建
曾暴发 ,日本奶牛产奶量损失达 26.6 (于大海等 , 立具有重要 的意义。
1997),1996年~1997年上海市曾暴发此病,发病牛 1 材料与方法
场中流产、早产、产死胎和畸形胎 的牛约 占2O96/~ 1.1 病毒 、试验动物与细胞系 赤羽病毒、蓝舌病
30 ,给养牛业造成了巨大的经济损失。 病毒 (bluetonguevirus,BTV)、鹿流行性 出血热病
毒 (epizootichaemorrhagicdiseaseofdeervirus,
修回 日期 :2008—08—12 EHDV)、牛传染性鼻气管炎病毒 (infectiousbovine
作者简介 :杨素(1967一),女,云南人 ,高级兽医师 ,博士 ,研究方 rhinotracheitisvirus,IBRV)、牛病毒性腹泻病毒
向:动物病毒学。
(bovineviraldiarrheadiseas
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