传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆与原核表达.pdfVIP

维普资讯 动物医学进展，2008，29(6)：50—53 ProgressinVeterinaryMedicine 传染性法氏囊病病毒 VP5基因的克隆与原核表达 吴 琼，马 明，何桂梅，陈明勇 (中国农业大学动物医学院，北京 100094) 摘 要：根据 GenBank已登录的传染性法氏囊病病毒 (IBDV)VP5基 因序列 ，设计合成 了一对 VP5基 因特异性引物，应用RT-PCR技术从 IBDV标准毒株 中扩增得到VP5基因，并将其克隆到原核表达栽体 pGEX一6P一1中，构建了重组原核表 达质粒 pGEX一6P一1一VP5，对重组表达质粒鉴定正确后，转化大肠埃希茵 BL21进行诱导表达 ，SDS和Westernblot检测结果表明，IBDVVP5基因在大肠埃希茵BL21中得 到了正确表达，所表达的融合蛋白与 IBDV 阳性血清具有特异性抗原抗体反应。 关键词：传染性法氏囊病病毒；VP5基因；基因克隆；表达 中图分类号：$852．659．4；Q786 文献标识码 ：A 文章编号：1007-5038(2008)06-0050-04 传染性法 氏囊病 (Infectiousbursaldisease， 接种的反应性降低，对多种疫病的易感性增高 ，形成 IBD)是 由传染性法 氏囊病病毒 (Infectiousbursal 免疫抑制现象 ¨，给养鸡业造成 巨大的经济损失。 diseasevirus，IBDV)所引起的雏鸡的主要传染病之 现已确认 的 IBDV主要结构蛋 白有 4种，即VP1、 一 ，该病的主要特征表现为雏鸡法氏囊淋 巴细胞大 VP2、VP3和 VP4E。另外 ，基 因组 A节段还可以 量坏死而不能产生免疫球蛋 白，使雏鸡对多种疫苗 编码一个 l7ku的蛋白质VP5，但是这种蛋白在病 收稿 日期 ：2008-03-10 作者简介：吴 琼(1981一)，女，辽宁人，硕士研究生，主要从事分子病理学研究。*通讯作者 料 料 *}※ Islolation andCharacterizationofChinese PRRSV IsolatesandSequenceAnalysisofStructuralGenes M A Ping，SHIW en-da，LIU Yong-gang，CAIXue—hui， WANGHong—feng，WANGShu-jie，LICheng-jun，ZHANG Qi (DivisionofSwineInfectiousDiseases，NationalKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechology， HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin，Heilongjiang，150001，China) Abstract：EightstrainsofPRRSV wereisolatedfrom pigfarmswhichseemedsufferingPRRS．JSltoJS5 strainscoulddeducecytopathogeniceffects(CPE)atthefirstgeneration．GD1toGD3strainsproducedcy— topathogeniceffects(CPE)afterthreeto fourpassages．Indirectimmunofluorescentassay (IFA)tests showedthatspecificfluorescenceoccurredin cytoplasm whenreactedwith antibodyagainstPRRSV．The virusdidnotresis