畜禽体外培养细胞生长规律研究.pdfVIP

中国畜牧兽医 2008年第 35卷第 11期 遗传繁育 ·65 · 畜禽体外培养细胞生长规律研究 陆涛峰 ，刘长青 ．一，吴宏梅 ，张艳艳 ．．，刘帅 ，包阿东 。，张文秀 ，关伟军 ，马月辉 (1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ，北京 100193；2．内蒙古农业大学，呼和浩特 010000； 3．中国海洋大学生命科学与技术学部，青岛 266003；4．西北农林科技大学，杨凌 712100) 摘要：本研究利用组织块贴壁培养法对鲁西黄牛、蒙古马、北京鸭和狼山鸡等 4个品种体外培养细胞的生长、分化规律进 行了研究。通过绘制其生长 曲线和在激光共聚焦显微镜下拍摄细胞生长过程 ，初步分析成纤维细胞 的生长、分化规律 。试验 结果表明，4个 品种 的细胞生长曲线均呈明显的 “s”形，家畜和家禽的细胞潜伏期和停滞期的长短以及细胞群体倍增时间均有 明显差异 ，蒙古马和狼山鸡体外培养细胞的单个细胞分裂期也有显著差异，蒙古马为 97min，而狼山鸡为 85min。本试验构 建的4个品种成纤维细胞系不仅使畜禽遗传资源在细胞水平永久保存下来，而且为分子生物学研究提供宝贵材料。 关键词 ：畜禽 ；成纤维细胞 ；生长规律 ；生长 曲线 ；分裂期 中图分类号：S813．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671-7236(2008)l1—0065—05 细胞培养技术始于 19世纪末 ，由胚胎学技术衍 1 材料和方法 生而来 ，其是指从体内组织取 出细胞在体外模拟体 1．1 试 剂和 仪 器 主要 试 剂：DMEM (Gibco)， 内环境下，使其生长繁殖 ，并维持其结构和功能的一 MEM (Gibco)，特级胎牛血清 (Hyclone)，胰蛋 白酶 种培养技术。在近一个世纪的发展 中，细胞培养技 (Amresco)。主要仪器：C02培养箱 (Heraeus)，超 术已从精细实验室 、对少数组织的小规模培养模式 纯水器 (Pal1)，DL—CJ一2N高性能无菌实验 台(哈东 向大型化 、自动化、精细化的方向发展。随着生物技 联)，IX一71倒置相差显微镜 (Olympus)；激光扫描共 术的发展 ，细胞培养技术 已成为生物制 品制备及基 聚焦显微镜 (Nikon)。 因工程等领域必不可少 的工具之一 (Doyle等， 1．2 试验材料 本试验以成年鲁西黄牛、蒙古马的 1990；关伟军等 ，2003)。研究体外培养细胞生长规 耳缘组织及北京鸭、狼山鸡胚胎组织为试验材料 ，以 律不仅有利于细胞体外培养技术发展 ，而且对于细 组织块贴壁培养法 (马月辉等 ，2005；余磊等 ，2004) 胞生物学研究也具有重要意义。 构建 4个畜禽品种的成纤维细胞系。 1．3 鲁西黄牛、蒙古马、北京鸭和狼 山鸡体外培养 收稿 日期 ：2008-03—20 细胞 系的建立 作者简介 ：陆涛峰(1982一)，男 ，河南人 ，硕士生 ，研究方向：动物 1．3．1 细胞原代培养 从组织保存液 中取出鲁西 遗传育种与繁殖 。 黄牛、蒙古马耳缘组织放入添加 了双抗 的PBS中， 通讯作者：关伟军 (1966一)，男，教授 ，博导，研究方 向：细胞分子 生物学 。Tel：010E—mail：wjguan86@ias— 小心去除毛发 、组织表面血污及坚硬的表皮组织 ，漂 caas．net．cn 洗 5～6次 ，用眼科剪剪切组织块成 1mm。左右 ，将 马月辉 (1964一)，男 ，博士，研 究员 ，博导，研究方