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不同缓冲体系的牛血清白蛋白插层蒙脱石效果.pdf

V01.30 第30卷第6期 华侨大学学报(自然科学版) No.6 of Nov.2009 2009年11月 JournalHuaqiaoUniversity(NaturalScience) 文章编号:1000-5013(2009)06-0661—04 不同缓冲体系的牛血清白蛋白插层蒙脱石效果 吕英海,周仕学,李桂江,王 斌,吕东琴 (山东科技大学化学与环境工程学院,山东青岛266510) 摘要:利用离子交换的原理,研究等电点两侧的不同pH值、不同缓冲体系对牛血清白蛋白插层蒙脱石效果 的影响.结果发现,pH值对蒙脱石插层影响显著.在采用低于蛋白质等电点的pH值且利用乙酸一乙酸钠作 为缓冲体系时,蛋白质的插层容易造成蒙脱石层问的剥离.等电点两侧的pH值不同,会造成蛋白质插入量的 显著差异.热重分析表明,蛋白质/蒙脱石复合物的热稳定性有一定程度的提高. 关键词:蒙脱石;牛血清白蛋白;插层;pH值;缓冲液 中图分类号:TB383.021 文献标识码:A 纳米复合材料中一相为有机聚合物,另一相为无机相时,称为有机一无机纳米复合材料.这种复合材 料不是有机相与无机相的简单混合,而是两相在纳米尺寸范围内复合而成的,从而产生许多特异的性 能,在生物学等领域展现出广阔的应用前景[1。3].蒙脱石(MMT)具有耐化学溶剂、粒径小、晶层可被嵌 入、比表面积大和易于吸附分子等特点[4].通过离子交换反应,可改变MMT晶体表面的化学性质,这为 制备蛋白质/蒙脱石混杂复合材料奠定了基础.牛血清白蛋白(BSA)晶体呈等边三角形(宽为14nm,高 为4nm),在溶液中的等电点为4.8[5].BSA可与多种阳离子、阴离子及其他小分子物质结合,常用作研 究蛋白质复合材料的模式蛋白;BSA可以逐步插层[5]进入蒙脱石.研究BSA与蒙脱石的相互作用,有 助于了解酶与粘土矿物的作用机制[6],对药物负载、可降解材料等方面的研究也具有重要意义.本文主 要研究不同pH值下,不同缓冲体系对牛血清白蛋白插层蒙脱石效果的影响. 1 实验部分 1.1材料 钠基蒙脱石(吉林省长春市),利用静沉降法提纯蒙脱石原土,提纯后加人体积分数为10%的 Hz02,煮2 h以去除有机物,过200目筛备用;牛血清白蛋白(分析纯,美国Sigma有限公司),在分析天 平上准确称量少量牛血清白蛋白,溶解到100mL蒸馏水中,按照Folin酚方法测定蛋白质标准曲线[73; 其他药品均为分析纯. 1.2蒙脱石对牛血清白蛋白的吸附 分别配制浓度为0.05 mol·L一,pH值为4.6的乙酸一乙酸钠、磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液;pH值 mL缓冲液,加入一 为6.2的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液体系.量取40 定量去有机物蒙脱石,然后加入3倍质量的BSA,超声振荡15min,混匀,静置12h,离心分离沉淀,取 出上清液;然后,用去离子水对沉淀物洗涤一次,合并上清液;最后,利用Folin法测定上清液中蛋白质 含量[8],沉淀于50℃烘48 h,研磨至粒径小于0.074ITlrll备用. 1.3复合材料的表征 晶体结构表征:采用TD-3000型X射线衍射仪(中国辽宁)扫描,钴靶,管电压为30kV,管电流为 20 收稿日期:2009-02—23 基金项目:国家自然科学基金资助项目;山东科技大学春蕾计划(2008AZz075) 万方数据 662 华侨大学学报(自然科学版) 2009年 士梅特勒一托利多公司),升温速率为10℃·min~,氮气氛围,扫描范围为30900℃. 2结果与讨论 2.1 X射线衍射分析 不同pH值的缓冲液体系,BSA插层蒙脱石而得到的复合材料的x

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