微透析取样技术及其在生化分析中的应用.pdfVIP

文献综述 微透析取样技术及其在生化分析中的应用* 汪海林 邹汉法* 孙生才 张玉奎 （中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究中心 大连 116011） 提要 对微透析技术及其在生化分析领域的应用作一综述。主要介绍了微透析活体取样的定量及与LC、 HPCE、MS等分析技术在线联用技术的发展，并涉及了利用微透析技术研究药物与蛋白之间的相互作用的有关 内容。 关键词 微透析技术，活体取样，药物与蛋白相互作用 液仅限于透析管内流动，与细胞外液体没有直接接 1 引言 触，大大减小了对活体组织的损害程度 刚性微透析 80年代中期兴起的微透析技术，在神经化学、 探针适用于脑、中枢神经系统和麻醉动物的其它组 药物学、生物行为科学和在体分析及药物开发等领 织 随后出现的灵活型微透析探针，与刚性探针的基 域的研究中发挥了独特的作用，逐渐受到生物医学 本构造相似，只是探针的外套采用具有弹性的硅胶 界和分析化学界的关注 自微透析技术的出现到 管等材料制成 灵活型微透析探针的出现大大拓宽 1992年已有800篇相关论文发表[1]近年来微透析 了微透析取样的应用范围 现在微透析取样技术已 技术及其应用研究发展迅速，这项技术在国内也已 应用于动物的许多部位取样，如肝脏、心脏、肺、肌 受到人们的重视2[,3]本实验室承担了有关微透析技 肉、皮下脂肪组织及血液等 本文对微透析取样的活 术研究的中国科学院院长特别基金项 目 体分析包（括微透析的定量、联用分析技术和实际应 微透析取样技术是由早期神经化学实验室中的 用）、前处理及药物和蛋白质的相互作用等方面作一 灌流取样技术发展和延伸而来的新技术 1961年 综述，其中活体分析 Gaddum[4]发明了推拉式灌流取样技术并应用于监 2 基本原理和微透析系统 测脑细胞外神经化学物质 Gaddum的推拉式灌流 探针由顶端开口的两个同心圆式不锈钢管构成，取 微透析取样技术以透析原理作为取样的基础: 样时钢管直接插入脑中，灌入人造脊髓液，在顶端开 透析管内外存在浓度梯度，物质沿浓度梯度逆向扩 口处，神经递质和其他代谢物进入探针而后被灌流 散 通常情况下，膜外样品基体浓度高于膜内浓度， 液带出 这项技术 自首次报道之后得到许多改 可透过膜的小分子物质扩散穿过膜进入透析管内， 进5[,6]，曾广泛应用于脑中许多部位的神经递质的检 并被微透析管内连续流动的灌流液不断带出，从而 测2[～9]但这种开 口式设计存在固有的缺陷:灌流液 达到从活体组织中取样的目的 这是一种动态连续 与细胞外液体直接接触，易引起组织感染且回收率 取样方法 单位时间内穿过膜的分子数即通量J，可 低；另外，取出的样品中含有蛋白质等大分子，液相 表达为[]: 色谱分析前须进行预处理，以除去蛋 白质等大分子 物质 1972年DelgadO等人最早报告了组织透析取 样技术，1982年Ungetstedt等人进一步发展了微透 其中Pm为渗透率，A为膜面积，C为膜内外的浓度 析技术[10]经过微透析取出的样品无需预处理可直 梯度，l为样品基体厚度，为曲率，Dm为扩散系数， 接进行高效液相色谱(HPLC)分析，同时由于灌流 K为Boltzmanne常数，T为绝对温度，为样品的粘 本课题为中国科学院院长特别基金资助项 目 通讯联系人 本文收稿 日期:1996年2月27日修回日期:1996年5月6日 度，r为分子半径 术联用，可同时提供多种化合物的浓度-时间曲线 方程 （1）说明了若两个分子大小不同，其通量