细胞色素P450酶系进行生化水平的部分研究毕业论文.doc

汕头大学硕士研究生毕业论文 邓瑞鹏：对疣荔枝螺细胞色素P450酶系及其基因CYP的研究 PAGE 48 目 录 目录………………………………………………………………………………………………1 中文摘要…………………………………………………………………………………………4 英文摘要…………………………………………………………………………………………5 缩略语……………………………………………………………………………………………7 1 前言……………………………………………………………………………………………8 1.1 环境激素及有机锡…………………………………………………………………………8 1.2 性畸变机制的相关研究…………………………………………………………………10 1.3 细胞色素P450酶系简介…………………………………………………………………12 1.3.1 细胞色素P450酶系的基本特征………………………………………………………12 1.3.2 对细胞色素P450的几点认识…………………………………………………………12 1.3.3 分类与命名……………………………………………………………………………12 1.4 CYP19、CYP4……………………………………………………………………………13 1.4.1 激素合成与CYP19……………………………………………………………………13 1.4.2 CYP4……………………………………………………………………………………14 1.5 细胞色素P450基因CYP的克隆策略……………………………………………………15 1.6 本论文的研究内容和研究意义…………………………………………………………16 2 主要仪器与试剂……………………………………………………………………………18 2.1 主要仪器…………………………………………………………………………………18 2.2 主要试剂…………………………………………………………………………………18 3 实验材料…………………………………………………………………………………19 4 实验方法…………………………………………………………………………………19 4.1 雌、雄及性畸变疣荔枝螺 P450酶系生化水平上的研究…………………………………19 4.1.1 微粒体酶源的制备……………………………………………………………………19 4.1.2 蛋白质含量测定………………………………………………………………………19 4.1.3 细胞色素P450含量测定……………………………………………………………20 4.1.4 细胞色素b5含量测定………………………………………………………………20 4.1.5 NADPH－细胞色素P450还原酶活性测定………………………………………20 4.1.6 SDS－PAGE…………………………………………………………………………20 4.2 对雌疣荔枝螺细胞色素P450基因CYP的探索研究……………………………………21 4.2.1 疣荔枝螺基因组DNA的提取………………………………………………………21 4.2.2 疣荔枝螺RNA的提取…………………………………………………………………21 4.2.3 对疣荔枝螺CYP19基因的探究………………………………………………………22 简并引物的设计与合成……………………………………………………………22 简并引物PCR反应条件的摸索…………………………………………………25 RT－PCR……………………………………………………………………………26 目的条带回收及二次PCR…………………………………………………………26 二次PCR产物的克隆………………………………………………………………26 4.2.4 对疣荔枝螺CYP4基因的探索…………………………………………………………28 简并引物的设计与合成……………………………………………………………28 RT－PCR反应的程序步骤…………………………………………………………28 4.2.5测序结果分析…………………………………………………………………………28 5 结果与分析…………………………………………………………………………………29 5.1 细胞色素P450酶系生化水平的分析……………………………………………………29 5.1.1 细胞色素P450的吸收光谱…………………………………………………………29 5.1.2 细胞色素b5的吸收光谱………………………………………………………………29 5.1.3 雌、雄和性畸变疣荔枝