董艺凝滁州学院水有机溶剂双相体系中乳糖溶解度的测定.pdfVIP

水/有机溶剂双相体系中乳糖溶解度的测定 1，3 1,3* 2 1 董艺凝 孙艳辉 陈玉萍 吴维 1 （滁州学院生物与食品工程学院安徽滁州 239000 2 滁州学院材料与化学工程学院 安徽滁州 239000 3 滁州市特色农产品深加工工程技术研究中心 安徽滁州 239000 ） 摘 要 水/有机溶剂双相体系酶促合成低聚半乳糖，能够抑制水解反应但也会影响底物乳糖的溶解度。本 研究选择乙醇、乙酸乙酯、乙腈3 种有机溶剂与水混合作为双相体系，采用DNS 法测定并分析了乳糖在不 同双相体系中的溶解规律。试验结果显示相同温度条件下，有机溶剂种类、加入比例是影响乳糖在双相体 系中溶解度的主要因素。室温条件下，三种有机溶剂对乳糖溶解度影响依次为乙腈 乙醇 乙酸乙酯。其中， 水分含量为10%的双相体系中，乳糖在乙酸乙酯中溶解度最高，为纯水中溶解度的54%；在乙腈中的溶解 度最低，为纯水中溶解度的 23%。极性小的有机溶剂对乳糖双相体系介稳区及饱和溶液平衡度影响较小。 本研究结果表明极性小的有机溶剂更适用于双相体系合成低聚半乳糖。 关键词 双相体系； 乳糖； 溶解度； 介稳区 乳糖是工业制备低聚半乳糖（Oligosaccharides，GOS ）的重要底物，由一分子葡萄糖和 一分子半乳糖经β-1,4 糖苷键连接而成。在β-半乳糖苷酶 （β-galactosidase ）的催化作用下， 乳糖可断裂形成葡萄糖和半乳糖。其中，半乳糖基可经β-半乳糖苷酶转糖苷催化与其他含 [1, 2] 有羟基的受体结合 。当受体为水分子时，即发生水解催化反应，形成半乳糖；而当受体 为其他糖分子时，即可合成低聚半乳糖 （GOS ）。低聚半乳糖是一种具有选择性增殖肠道益 [3] 生菌特性的益生元，并已被开发成为重要的商业化食品添加剂 。在美国低聚半乳糖已被认 为公认安全食品（GRAS ），欧盟也将其列为非新型食品(a non-Novel Food) ，日本亦将其用 [4, 5] 作特殊健康需求食品（FOSHU ），具有良好的市场发展空间 。但在我国低聚半乳糖的生 产和应用还处于初级阶段，有待于产量提高和工艺技术的改进。 限制低聚半乳糖合成量的主要原因在于 β-半乳糖苷酶的过程中存在着水解和转糖苷两 [6] 种反应的动态平衡 。在水相催化体系中，这一动态平衡以水解反应为主，导致酶法合成低 [7-9] 聚半乳糖产量受限 。而水/有机相双相反应体系可以通过控制水分含量及活度，有效对水 解反应进行调控与抑制，进而提高转糖苷催化效率。但同时，双向反应体系溶剂对底物乳糖 [10] 的溶解度和稳定性均有影响，并与低聚半乳糖终产物的生成量有直接关系 。本项研究基 于双向体系酶法合成低聚半乳糖的研究背景，选择乙腈、乙醇和乙酸乙酯三种极性不同的有 机溶剂与水组成双相体系，测定并研究了不同比例有机溶剂组成及温度条件下，双向体系乳 糖溶解度变化规律。通过对介稳区及乳糖微晶晶型的比较，分析探讨了有机溶剂对乳糖溶解 度平衡的影响。以期通过本项研究，为双向体系中高饱和乳糖溶液的制备与稳定条件的获得， 基金项目：国家自然科学基金青年项目 ；安徽高校省级科学研究项目(KJ2013B187) ； 滁州学院科研启动基金资助项目(2012qd14) 。 作者简介：董艺凝(1980-) ，女，博士，研究方向：酶的功能进化。 *通讯作者：孙艳辉 提供数据基础。 1 材料与方法 1.1 试剂、仪器与设备 乳糖、乙腈、乙醇、乙酸乙酯， 酒石酸钾钠、3，5-二硝基水杨酸（DNS ）、苯酚、无 水亚硫酸钠、葡萄糖均为分析纯试剂，购于国药集团化学试剂有限公司。 JSM—6510LV 扫描电镜，日