蓝细菌分离DnaE内含肽的自我剪接研究.pdfVIP

( ) Vol . 37 No . 2 第 37 卷 　第 2 期 西北农林科技大学学报 自然科学版 2009 年 2 月 J ournal of Nort hwest A F U niver sit y (Nat . Sci . Ed . ) Feb . 2009 蓝细菌分离 Dna E 内含肽的自我剪接研究 a b a a 魏新元 ,丑敏霞 , 闻盼盼 ,刘东斌 ( 西北农林科技大学 a . 食品科学与工程学院 ,b . 生命科学学院 , 陕西 杨凌 7 12 100) [摘 　要] 　【目的】证实蓝细菌 A nabaena sp . PCC 7 120 复制酶中分离的 Dna E 内含肽的自我剪接活性 。【方法】 分别将 A nabaena PCC 7 120 中分离的2 个 d na E 基因的部分序列克隆到表达载体上 ,获得重组表达质粒 ,经超量表达 和纯化后 ,免疫家兔获得相应的抗体 ; 同时 ,两段分离的 d na E 序列被克隆到同一表达载体 ,构建双重组表达质粒 ,两 段序列具有各自的 ORF ,但由同一启动子调控 。双重组表达质粒经诱导之后 ,利用以上获得的抗体对含有内含肽的 Dna E 蛋白在大肠杆菌表达体系中的自我剪接反应进行检测 。【结果】在双重组表达质粒的表达产物中 ,抗体不仅可 以分别与对应的蛋白质反应 ,而且还可以同时识别 1 条新条带 ,该条带的表观分子量与成熟 Dna E 的理论值大致相 符 。【结论】蓝细菌分离的Dna E 内含肽在大肠杆菌表达体系中可以进行自我剪接 ;本研究中获得的抗体具有较好的 特异性 ,无明显背景干扰 ,而且效价高 ,抗体可以稀释 1 000 倍以上使用 ,也可以用于相关方面的研究 。 [ 关键词] 　Dna E 内含肽 ;重组表达质粒 ; 自我剪接 ;蓝细菌 [ 中图分类号] 　Q503 [文献标识码] 　A [文章编号] 　167 19387 (2009) 020 16005 Study on selfsplicing of split int ein of the DNA polymera se Dna E in cyanobact eria W EI Xinyuana ,C HOU Minxiab ,W EN Panp ana ,L IU Dongbina ( ) a. Col leg e of Food S cience an d Eng i neeri ng , b. Col leg e of L if e S cience , N ort hw es t A F Uni vers ity , Yang l i ng , S haanx i 7 12 100 , Chi na Abstract :【Obj ective 】The double reco mbinant exp re ssion p la smid wa s cloned to det er mine t he self sp licing activit y of sp lit int ein