大鼠脑缺血急性期脑组织miRNA的表达变化.pdfVIP

一24一 重庆 医科大学学报2∞8年第33卷增刊l ( J oumaI of Chongqi ng Med i caI Uni ver s 时2 ∞8．V01．33 No．s 1 质量检测。标记mi RNA，mi RNA芯片杂交 ，洗片 ，数据 处理等 ， 后，轻微离心后标记产物放置于4℃ 以备后续杂交反应使用。 由上海康成生物工程有 限公司完成 。 1．3．4 mi RNA芯片杂交将 12 ．5肛l 标记产物、90斗l 的1．5 × 1．3 ．1 抽提RNA Hyhr i di zat i o n bu雎r 、77 ．5斗l 无RNA酶的水混合，与mi RNA表达 首先使用Bi opu l v er i z er (Bi os pe c公司，美国 冰冻粉碎组织 谱芯片( Exi qon公司，丹麦 、95℃避光孵育2mi n；孵育后冰上 后；采用Mi n i —Be ad—Bea t er - 16(Bi o spe c公司，美 国 进行匀浆； 放置2mi n ；使用热收缩杂交袋( Pha l anx 公司 ，中国台湾 杂交 匀浆后脑组织样 品于 15—30 ℃孵育5mi n ，4 ℃，12 0009离心 过夜；杂交温度为56℃，杂交转速为2r ／mi n 。 15mi n 。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相 ，中间层 1．3 ．5洗片杂交后，将芯片从杂交袋中取出，用mi RcuRYTM 核上层的无色的水相。将水相转移到新离心管 中，加入O．5ml Ar r ay Wash bu 艉r ki t (Exi qon 公司 ，丹麦 洗片，按 照说明书 异丙醇，混匀后15～30 ℃孵育l Omi n。4 ℃，12 0009 离心l Omi n 。 进行 。洗片后 ，2009离 心5mj n以甩干芯片 ，芯片干燥后立即扫 移去上清液 ，加入l ml 的75 ％乙醇，清洗RNA沉淀 。振荡后， 描，所得数据进行 相关软件分析。 4℃，7 50( g离心5mi n。去除乙醇溶液 ，空气 中干燥RNA沉淀 5～10mi n。无RNA酶 的水溶解RNA，保存于一70℃。 2结果 1．3．2 RNA质量检测 采用紫外吸收测定法检测RNA溶液 的0D260‰的比值，范围1_8～2 ．1。 2 ．1 RNA质量检测 1．3．3 标记mi RNA 采用mi RcuRYTM A丌_ ay P0wer L丑bel i ng 经检测，所有样本的RNA符合mi RNA表达谱芯 ki t (Exi qon 公司 ，丹麦 标记，按 照说明书进行。终止标记反应 表1不 同药物引起的肝功能损害比较 片的要求，可 以进行后续实验 。 表2上调2倍 以上的mi RNA 2．2 mi RNA芯片表达结果 Nal l l e I D 2VO，正常 因为正常组与假手术组之间mi RNA表达 比较 mi RPl u