mtDNA突变与大肠癌发病关系的基础研究.pdfVIP

维普资讯 现代消化及介入诊疗 2007年 第 12卷 第4期 ModemDigestionIntervention2007，Vo1．12，No．4 217 一 论 著 · mtDNA突变与大肠癌发病关系的基础研究 肖 冰 宋卫兵 姬宏莉 阎 丽 赖卓胜 王亚东 摘【要】目的 观察大肠癌突变型mtDNA转导NIH3T3细胞后转染细胞的生物学特性。方法 通过脂 质体法 (1ipofection2000MT)将大肠癌细胞突变的mtDNA真核表达载体转染NIH3T3细胞 ，利用G418抗 性筛选克隆细胞；用荧光标记的染色体原位杂交(FISH)观察mtDNA在核内的整合情况；观察转染前后 细胞异型性及进行染色体核型分析；PCR法检测转染细胞线粒体突变情况：流式细胞仪(FCM)检测转染 细胞的凋亡情况；用四唑盐比色法 (MTT)测定不同组间细胞增殖的吸光度值。结果 突变的大肠癌 mtDNA可通过影响NIH3T3细胞的mtDNA的突变 、多态性和通过外源性mtDNA在核 内的整合从而影 响NII-I3T3细胞的染色体核型及细胞增殖、凋亡等生物学行为。结论 突变型mtDNA可能参与大肠癌的 发生与发展。 【关键词】线粒体DNA；突变；荧光原位杂交；细胞增殖；凋亡 PreliminarystudyontherelationshipofmutatedmtDNA andcolorectalcancerX1A0Bing．SONG W — bing，J1Hong一 eta1．InstituteforDigestiveDisease，NanfangHo~imL SouthernMedicalUniversity， Guangzhou 510515,China A【bstract】ObjectiveToobservethebiologicalfeaturesofNIH3T3cellafterinfectedbymutatedmtD— NA from colorectalcancercellline． M ethodsRecombinantofthemuattedmtDNA andeukaryoticcellex- pressionplasmidwastransfectedintofibroblastcellNIH3T3usinglipofection2000MT， na dclonedcellswere screenedbyG418． TheintegrationsattusofexogeneticmtDNA onnuclearwasobservedbyfluorescencein situhybridization． Cellulra heteromorphism pro—nadpost—transfectionwascompraed， na dc~omosomal karyotypena alysiswascompraed．ThemuattionoftransfectedNIH3T3cellsmtDNA wasdetectedbyPCR， na dapoptosiswasconfirmedbyflow cytometry． TheOD valueofcellproliferationindifferenttimesnad groupswasmeasuredbyMTTcolorimetricmehtod．Results Th eaffectionofmuattedmtDNA onhtebiologi— calactivitiesofNIH3T3cellsuchasc~omosomalkaryotype， proliferation， andapoptosishadbeenobserved onitsmuattionorpolymorphism by integratingexogeneticmtDNA intohtenuclera．Conclusion Th emutated mtDNAmightaffecthtemechna ism inoccurrenceanddevelopmentofcolorecatlcarcinoma K【eywords】MitochondrialDNA；M