MTHFR A1298C和CBSG919A基因突变与青年缺血性脑卒中的研究.pdfVIP

维普资讯 中国实验诊断学 20O7年 12月 第 11卷 筮 — 1697 一 文章编号：1007—4287(2007)12—1697—02 MTHFRA1298C和 CBSG919A基因突变 与青年缺血性脑卒中的研究 南光贤，王利平 ，卜淑霞 (吉林大学中Et联谊医院脑血管病介入科，吉林 长春 130033) 血浆中同型半胱氨酸(Hcy)水平增高是缺血性 液相色谱法测定受试者空腹及负荷后血浆 Hey水 脑卒中的独立危险因素。有研究认为，轻中度 Hey 平，以聚合酶链式反应一限制性片段长度多态性分析 浓度增高与脑卒中的发生密切相关。N5，N0一亚 甲 法 (PCR—RFLP)分析检测 MTHFRA1298C和 CBS 基四氢叶酸还原酶是 Hey代谢的关键酶，胱硫醚 G919A突变的基因型。 合成酶是Hey代谢的相关酶，本研究拟采用聚合酶 1．2．3 PCR扩增 引物设计 MTHFRA1298C：上游 链．限制性内切酶片段长度多态性分析 (PCR—RFIP) 序 列 ：5-CrrIW GGGAC3~AAGGAC 下 游 序 列：5一 和扩增阻滞突变体系法，对血浆 同型半胱氨酸 CACrrI；1℃ACCATrCCG( PCR产物长 84bp。 (HCY)代谢关键酶N5，N 亚 甲基四氢叶酸还原酶 CBSG919A 引物 ：上 游．野生型 5’．CTACGAGGTG． (^ⅡHFR)基因A1298C位点和相关酶胱硫醚一一合酶 GAAC,GGATCG-3’突 变 型 5’一 1ACCAGGTCGl (CBS)基因G919A位点碱基突变与青年缺血性脑卒 AAGC~A TCA一3’下 游．纯 合 型 5’一GCCTCCT． 中的关系进行研究。 CATCGTrGCTCTr-3’PCR产物长655bp。 1 资料与方法 反应条件：94℃预变性5min；进入循环：94℃变 1．1 研究对象 人选标准：①1996年中华医学会第 性 30s，56℃复性5Os，7O℃延伸 1min；38个循环后 四次全国脑血管学术会议制定的脑血管病诊断标 72℃延伸 10min，4℃终止反应。PCR反应结束后， 准，确诊为缺血性脑卒中，均经头CT或 MRI证实。 取5 l扩增产物用2％琼脂糖凝胶(内含EB)进行电 ②年龄≤45岁。③随机选取。排除标准：①肺、肝、 泳。以1×TAE为 电泳缓冲液，100V电泳 30min。 肾疾病、糖尿病、心源性栓塞、甲状腺疾病、银屑病、 紫外灯下观察结果。酶反应条件：20 l反应体系中 恶性肿瘤的患者。②脑栓塞、腔隙性脑梗死、及TIA 加入 2 l缓冲溶液，HinfI15U，扩增产物 1 ，去离 患者。③无一、二、三级血缘关系。 子水补足至20 l。放置于37度恒温箱中3h后取 1．1．1 病例组：100例，选取2003年04月一2004年 出。内切酶消化产物用 2％琼脂糖凝胶 电泳，紫外 12月住院的病人。均为发病 2d内住院的青年脑梗 灯下酶切结果。 死病人。其中男性73例，女性27例，年龄 27—45 1．2．4 统计学处理 所有资料 由计算机运用 岁，平均年龄 41．504-4．80。 SPSS10．0版本软件进行比较分析 ，计量资料以露-4s 1．1．2 对照组 ：100例，男性7O例，女性 3O例，年龄 表示，组间比较用u检验，计数资料用 检验，计算 18—45岁．，平均年龄 38．564-4．10，均为正常青年。 各组等位基因频率，并按 Hary—Weinberg平衡法检验 性别与病例组无明显差别(P0．05)。 样本的群体代表性。组间频率比较采用 检验，缺 1．2 研究方法 血性脑卒中是否发生与遗传基因多态性的关联程度 1．2．1