N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V表达下调可通过GLUT1的糖基化改变和活性下降引起人肝癌SMMC-7721细胞内质网应激.pdfVIP

维普资讯 复 里学提 ‘医 学版 Fudan Univ JMed SSci2二u0u07Sep,34、(5) 647 Univ M ed N一乙酰氨基葡萄糖基转移酶 V表达下调可通过 GLUT1的糖基化改变和活性下降引起人 肝癌 SMMC-7721细胞 内质 网应激 方 芳 张 力 王 琼 李 姣 申宗侯 (复旦大学上海 医学 院生物化学与分子生物学系 上海 200032) 【摘要】 目的 初步探讨 N一乙酰氨基葡萄糖基转移酶 V (GnT_V)表达 下调的人肝癌细胞 SMMC-7721中引起 内质 网应激 的机制 。方法 利用 RT_PcR检测 SMMC-7721(以下简称 7721)细胞 中葡萄糖转运蛋白(GLUT)的 表达情况 ，利用 Westernblot、免疫沉淀及凝集素印迹分析检测转染 了反义 GnT—V 的SMMC一7721细胞 (以下简 称 As／7721)以及转染空质粒 pcDNA3的 sMMC_7721细胞 (以下简称 Mock／7721)中GLUT1的 N一糖链变化 ， 利用葡萄糖摄取率分析来检测 以上 3种细胞 中GLUT1葡萄糖转运活性 的变化。结果 在 As／7721细胞 中 GLUT1的N一糖链糖基化水平较 Mock／7721明显下降，而且其 GLUT1的葡萄糖转运活性也较 Mock／7721细胞 明显下降。结论 葡萄糖转运蛋 白GLUT1N-糖基化 的改变和转运活性 的下降可能是 GnT—V表达下调 的 SMMC一7721细胞中引起 内质 网应激 的机制之一 。 【关键词】 N一乙酰氨基葡萄糖基转移酶 V； 葡萄糖转运蛋 白； GLUT1； 内质 网应激 【中图分类号】 R735．7 【文献标识码】 A Down r‘‘egulationofN ·a‘cetylglucosaminyltransferaseV inducesendoplasm ic reticulum stressbychangingglycosylation and down·r·egulationfunctionofGLUT1inSM M C··7721cells FANG Fang，ZHANG Li，WANG Qiong，LIJiao，SHEN Zong—houA (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，ShanghaiMedicalCollege， FudanUniversity，Shanghai200032，China) [Abstract] Purpose Tostudythemechanism oftheendoplasmicreticulum stress(ER—stress)hap— penedinhumanhepatocarcinomacelllineSMMC—7‘721whoseexpressionofN—-acetylglucosaminyltrans—— feraseV (GnT—V)wasblocked． Methods TheexpressionofglucosetransportersinSMMC一7721 cellwasdetectedbyRT—PCR．Theglycosylationchangeofglucosetransporter1(GLUT1)inbothan— tisenseGnT—Vtransfectant(As／7721)andmockpcDNA3transfectant(Mock／7721)cellsweredetec— tedbyW esternblot，immunoprecipitationandlectinblot．ThetransportactivityofGLUT1wasdetec— tedbygl