NaCl对玉米细胞保护酶同工酶的影响.pdfVIP

维普资讯 第 29卷 第 6期 临沂 师 范 学 院学 报 2007年 12月 、，01．29 NO．6 JournalofLinyiNormalUniversity Dec．2007 NaCl对玉米细胞保护酶同工酶的影响 孙建伟 (临沂师范学院 生命科学学院，山东 临沂 276005) 摘要：以鲁单98l和强盛 l号的为试验材料，采用同工酶电泳技术，研 究NaC1对玉米细胞保护酶同 工酶的影响，结果表明，用 10％NaC1处理后，在取样 时间内，实验组的CAT同工酶谱带均明显增强，POD 同工酶谱带也增强，在SOD 同工酶谱带中，实验组的谱带要强于对照纽；而且，不同品种之间有一定的 差别．玉米细胞保护酶在玉米对NaC1的抗性 中可能具有重要的作 用． 关键词：NaCl；玉米细胞保护酶；同工酶；影响 中图分类号：Q948．12 文献标识码：A 文章编号：1009—605l(2007)06—0067—04 盐胁迫是制约农作物产量的主要逆境因素之～，对植物有着多方面的影响．迄今为止，对植物 的耐盐机理仍没有彻底了解，植物抗盐中的许多重要问题仍有待于探索．植物细胞保护酶与植物的 抗逆性具有非常密切的关系．本文以玉米为实验材料，采用同工酶电泳技术，初步研究了NaC1对玉 米细胞保护酶同工酶的影响，旨在揭示盐胁迫对植物影响的初步机制，为玉米抗逆性品种的选育提 供必要的研究基础． 1材料与方法 1．1供试材料 选择鲁单981(亲本为齐 319xLw9801)和强盛 1号 (亲本为912x922)2个玉米杂交种为供试材料， 均购 自山东省临沂市种子公司．挑选颗粒饱满无损伤的玉米种子用 0．3％的NaC10溶液消毒 30min， 用水冲洗干净后，置温室中催芽；然后将种子种植在塑料筐 (大小为40x60xl5cm)中，每筐40株．每 个玉米品种种植2筐，一筐作为对照，另一筐进行实验 ．种植后置温室中常规栽培管理，待其生长至 6叶期时供实验用． 1．2材料处理 当玉米幼苗生长至六叶期时开始进行NaC1处理：通过预实验，确定NaC1的处理浓度为 10％，将每 个玉米品种的实验组用 10％NaC1处理，对照组用等量的清水浇灌．分别于处理完成后 0、1、2、3、4、5 天取第五叶片并立即提取酶液 ． 1．3酶液提取 采用罗广华、王爱国 [11的方法提取酶液．酶液按4：1(v／、，)加入50％甘油混合分装，于一20℃冰 箱保存备用． 1．4同工酶 电泳 聚丙烯酰胺凝胶 电泳按Davis的方法 f21进行．缓冲液系统采用pH7．8的 s_-甘氨酸系统，分离 胶采用过硫酸铵聚合系统，浓缩胶采用光聚合系统．CAT电泳的分离胶浓度为5．6％，POD电泳的分 离胶浓度为7．5％，SOD电泳的分离胶浓度为 10％；浓缩胶浓度均为2．5％，上样量均为30山，电泳在4 ℃下进行，当前沿处于浓缩胶时恒压为200V，当前沿处于分离胶时恒压为300V，电泳时间约3h，以 收稿 日期：2007—08—30 基金项 目：临沂师范学院科研基金 (XJS04064) 作者简介：孙建伟 (1969一)，男，山东苍山人，临沂师范学院讲师，硕士．研究方向：植物分子生物学 维普资讯 临沂 师 范 学 院学报 第 29卷 0．0075％的溴酚兰为前沿指示剂． 1．5同工酶谱染色 CAT同工酶染色按下面的方法进行：① 0．5％的H202中漂洗 1-2min，倒去；②用酸化的0．5％的 KI染色 3-5min；③用水漂洗 ，可看到兰色背景下的透 明的酶谱带；POD同工酶染色参照吴少伯 [3】的 方法进行，配方如下：取联苯胺母液 (2g联苯胺溶于 18ml冰 乙酸 中，再加入 72ml水)25ml，加入水 260ml，1M 的Tris5ml，染色前加入 10ml的3％H2O2，染色 3-8min，至兰色条带充分显现后，用流动的 自来水冲洗至条带变为红色；SOD同工酶染色按王爱国、