N^＋和Ti^＋离子注入井冈霉素生产菌诱变筛选高产菌株的研究.pdfVIP

维普资讯 第 25卷 第6期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vo1．25，No．6 2007年 12月 J．Radiat．Res．Radiat．Process． December2OO7 N+和 Ti+离子注入井 冈霉素 生产菌诱变筛选高产 菌株 的研究 虞 龙 安 肖 (南京工业大学制药与生命科学学院 南京 210009) 摘要 利用N+和 离子注入对井冈霉素生产菌株进行诱变选育，比较了出发菌株经过两种离子源注入后的诱 变效应。初步探索使用金属离子和气体离子交替注入诱变方法，得到了较高的正突变率和突变增幅。用该方 法诱变得到一株高产菌株B1．3，其产井冈霉素A组分的效价为21514，比出发菌株提高54．4％。经多次传代 实验表明该菌株的遗传稳定性较好。 关键词 离子注入，诱变，选育，井冈霉素 中图分类号 Q937，Q31933，$435．111．42，TQ465．9+2 井冈霉素是一种主要用于防治水稻纹枯病的碱 1．2 培养基 性水溶性抗菌素¨J，主要成分是井冈霉素A、B、E、 F，井冈羟胺A、B以及少量的井冈霉素c、D，其 固体培养基(gL·-)：葡萄糖 10、L一天冬酰胺 中含量最多，活性最强的是A组分2【3】。作为一种绿 0．5、K2HPO40．5、琼脂 15、pH 自然。 色，低毒对人畜无害的生物农药，井冈霉素的应用 摇瓶发酵培养基(gL·-)：大米粉90、黄豆粉20、 价值越来越得到认可 。 花生粉 10、酵母粉 10、KI-I2PO40．85、NaC11．5、pH 目前我国井冈霉素的生产企业多达30多家，产 自然 。 品严重供过于求，售价逐年下降，竞争十分激烈。 1．3 培养方法 井冈霉素生产厂家所用的井冈霉素生产菌株几乎都 是经过紫外诱变5【’6】、微波诱变 、6OCo辐射诱变等 将实验室保存的吸水链霉菌井冈变种的孢子悬 方法得到的突变菌株。菌种对这些诱变手段产生了 液以不同的稀释度在平板培养基上进行涂布分散， 不同程度的钝化现象，导致国内井冈霉素发酵生产 38~C培养三四天，挑选形态圆整的单菌落至斜面培 水平一直徘徊在 1000013000(单位pglmL，以A 养二三天，接种至发酵培养基中培养92～96h，测 组分计，下同)的水平上。我们通过N和Ti离子交 定井冈霉素A的效价。摇瓶装液量为40rnL，接种 替注人诱变方法得到了发酵效价稳定的高产菌株 量为一环孢子，培养温度38~C，摇床转速220r／min。 B1—3，其摇瓶发酵得到的A组分效价可达到21514， 1．4 筛选方法 比出发菌株(A组分效价 13931)提高了54．4％，经多 次传代证明该菌株遗传稳定性 良好。 1．4．1 初筛 据文献报道，形态为中心吸水状的单 菌落发酵生产抗生素水平比其它形态的高[5】。本实 1 材料与方法 验室经过长期多次实验证实了这一结论。选取诱变 平板上中心吸水型的单菌落进行摇瓶发酵。 1．1 菌种 1．4．2 复筛 将平板上筛选的单菌落接种斜面，培 吸水链霉菌井 冈变种 (Streptomycesh