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菌物研究 2005 , 3 4 :15 - 18
Journal of Fungal Research Vol3 ,No4 , 2005 ISSN 1672 - 3538
黑木耳 ISSRPCR 反应体系的正交优化①
唐利华, 肖 扬, 边银丙 ②
华中农业大学应用真菌研究所 ,湖北 武汉 430070
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摘 要 : 采用正交试验设计的方法 ,对黑木耳 ISSR - PCR 简单重复序列区间多聚酶链反应 反应体系中的
( 2 + )
5 种主要因素 Taq 聚合酶 ,Mg ,模板 DNA ,dNTP 及引物 4 个水平进行优化筛选 ,确立了适合黑木耳 ISSR 分
( μ)
析的优化反应体系 20 L ,通过梯度 PCR 试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。
关键词 : 黑木耳 ; ISSRPCR ;正交设计 ;梯度 PCR
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中图分类号: S6466 ;Q78 文献标识码 : A 文章编号 : 2005
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ISSR InterSimple Sequence Repeat , 简单重复 供 、971 陕西汉中植物研究所提供 、C21 陕西
) ) (
序列区间 标记技术的基本原理是利用在 3′或者 微生物研究所提供 、C22 陕西微生物研究所提
) ( ) (
5′端加锚了 1～4 个随机碱基的引物 ,对两侧具有 供 、173 陕西西乡食用菌研究所提供 和 186 陕
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反向排列的简单序列重复 Simple Sequence Re 西西乡食用菌研究所提供 8 个菌株用于反应体
peat ,SSR) 间的基因组片段进行扩增[1 ] 。由于 IS 系稳定性检测。
SR 技术具有稳定性高 ,简单快捷等特点 , 已经广 1. 2 试剂和仪器
泛应用于植物的品种鉴定、遗传作图和遗传多样 ISSRPCR 反应所用的 Taq 酶 , dNTP 及 DNA
[2 ] ( ) ( ) (
性等方面的研究
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