PSA及NCAM表达差异COS-7细胞的建立及PSA对COS-7细胞迁移侵袭能力的影响.pdfVIP

维普资讯 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2007Dec；23(12)：1565-70 ·1565 · PSA及NCAM表达差异 CoS．7细胞的建立 及PSA对 CoS．7细胞迁移侵袭能力的影响 程亚彬，李 静，戴 功，耿美玉 (中13t海洋大学医药学院分子药理室，山东青岛 266003) 中国图书分类 号：R329．24；R394．2；R394．3；R73-37； NCAM、PSA表达差异的COS-7细胞，并利用该细胞 R977．6 探讨PSA对细胞迁移侵袭能力的影响，为今后进一 文献标识码 ：A 文章编号：1001—1978(2007)12—1565—06 步研究PSA对肿瘤转移的分子机制奠定基础。 摘要：目的 构建PSA与NCAM表达差异的COS-／细胞，并 1 材料与方法 检测PSA的表达对细胞粘附、迁移侵袭能力的影响，为今后 1．1 试剂 endo—N—EGFP融合蛋 白为 AnneJokil— 进一步研究PSA介导的细胞迁移侵袭信号通路变化，阐明 ammi(芬兰)赠；PSA．CD56抗体购 自BD公司 (货 PSA对肿瘤转移影响的分子机制奠定基础。方法 该文通 号：556325，克隆号：12F8)；其他试剂均为进 口或国 过双转染质粒构建 PSA与 NCAM表达差异的 COS-／细胞 株 。利用流式细胞术及 Westernblot方法检验转染效率；采用 产分析纯。山羊抗大鼠IgM：HRP抗体、山羊抗小鼠 MTI法检测PSA表达差异 COS-7细胞的增殖；粘附分析法 IgG：HRP抗体均购 自Sigma公司；培养基购 自Gibco 检测COS-／细胞对细胞外基质 Fn的粘附能力；利用 tran- 公司；其它生化试剂均购 自上海生工。 swell小室比较PSA与NCAM表达差异的COS-／细胞迁移、 1．2 质粒载体、菌株和细胞株 真核表达质粒 侵袭能力。结果 PSA与NCAM表达差异COS-7细胞构建 FDNA3．1-eyme载体 由本室保存；真核表达质粒 成功。PSA可降低 COS-／细胞与基底膜的粘附，增强其迁移 pcDNA3．1·v5S·TX、pcDNA3．1一v5一NCAM 由Kristin 及侵袭能力。结论 该文所建立的PSA与NCAM表达差异 Geiger友情馈赠；COS-7细胞购 自中科院上海生化 的COS-7细胞株可用于今后进行 PSA对细胞迁移侵袭信号 与细胞所 。 通路影响的机制研究。 1．3 仪器 PTC一100PCR仪 (Bio—Rad，美 国)， FACSVantageSE流式细胞仪(BD，美国)，蛋 白电泳 关键词 ：PSA；NCAM；COS-／；迁移；侵袭；肿瘤 仪及转膜装置(GEHeahheare，美国)，Rainbow酶联 免疫酶标测定仪：奥地利 Tecan公司，GeneGenius 多聚唾液酸(PSA)是一类线性、均一多聚 ，8 凝胶扫描成像系统：美国Syngene公司。 连接唾液酸的独特糖链 ，由糖基转移酶 STX催化， 1．4 方法 它主要通过典型的N连接糖苷键附