苏云金芽孢杆菌-94001-菌株发酵工艺优化的研究.pdfVIP

苏云金芽孢杆菌“94001刀菌株发酵工艺优化研究 吴继星 陈在佴 (湖北省农科院BT研究开发中心430064) 摘要：对苏云金芽孢杆菌94001菌株进行了发酵工艺研究。获得最佳发酵工艺为：通气量 l：O．5．1．2，培养温度34℃搅拌速度250r／min。40M3发酵罐三批发酵试验，平均发酵效价 6484IU／lll。平均晶体含量0。61％。 关键词；苏云金芽孢杆菌“94001”，正交设计，发酵水平 中图分类号： 文献标识码； 文章编号： THE TECHNOLoGYOF STUDIESON FERMENTATION BACILLSTHURINGIENSIS“94001’’ CHENZai—er 1砌Ji—xing Btgeserchand centreYuhan430064) (ttubei deve]opment resultsof2．3M3fermentershowedthatthemostfavorable Abstract：Experimental ventilatationwas quantityl：O．5一1．2。temperaturewas34℃， and of valueof rotatingspeedwas250r／minthatonexperimentation40M3fermenter，the and contentreached6484IU／u1 dnd potencycrystalprotein 0．61％respectively． words：Bacillus Key thuringiensis“94001；Orthogonaldesign；Fermentation 苏云金芽孢杆菌“94001”菌是作者1994年在甜菜夜蛾幼虫尸体中分离获得的一株对鳞 翅目昆虫高毒的优良菌株。经实验室生物测定和田间试验示范证实，该菌株对抗性小菜蛾、 棉铃虫、松毛虫和甜菜夜蛾低龄幼虫均有较高的杀虫毒力。目前，高毒苏云金芽孢杆菌的选 育，特别是高毒广谱工程菌株的构建成为研究工作的热点。但是，为了有效获得高效优质产 品，发酵工艺的优化显得尤为重要。本文主要报道以培养温度、通气量、搅拌速度为因素， 采用正交设计“’的方法，进行工艺优化的研究结果。 1．材料和方法 1．1菌株 由本中心实验室分离菌株。 作者简介：吴继星(1946-)男，研究员 收稿日期t ．66． 1．2培养基 号10．O，灭菌后PH6．7。 1．3发酵工艺参数优化 以培养温度、通气量和搅拌速度为因素，采用正交设计方法在2．3M3发酵罐中进行工艺 条件优化试验。投料体积按总体积的65％计。 1．440M3发酵罐试验 按总体积的65％投料，添加消泡剂40Kg，消毒灭菌，冷却后以压差法接入400ml(1 亿芽孢／m1)孢子悬浮液，发酵过程按优化条件控制。待30％以上芽孢晶体脱落后终止培养， 取样测定生物效价和晶体蛋白含量值。 1．5效价测定 程序操作‘扣。 1．6晶体蛋白含量测定 采用SDS凝胶电泳，利用Image-ID软件，通过计算机扫描凝胶测定u1。 2 结果与分析 2．1 发酵工艺条件优化 按表IL9(34)因素水平进行发酵工优化工艺实验，以获得Bt94001菌株的最佳发酵工艺参 数。正交设计方案和发酵工艺条件优化结果见表l、表2。 表1 L9(34)因素水平 ．67-