紫色杆菌素基因簇的分子克隆、异源表达与高效合成.pdfVIP

紫色杆菌素基因簇的分子克隆、异源表达和高效合成 1* 2 1** 蒋培霞 ，王海胜 ，卢元，邢新会 1 2 （清华大学化学工程系生物化工研究所，北京 100084; 中国农业科学院农业资源与农业区 划研究所，北京 100081 ） 摘 要：紫色杆菌素具有很重要的生物活性，可以作为潜在的抗肿瘤、抗病毒药物及生 物染料。挖掘合成蓝紫色色素的微生物资源并建立其微生物高产生产工艺具有重要的研究价 值。本研究自新疆冰川样品分离到一株产紫色杆菌素的耐冷细菌B2，采用PCR walking 方 法成功的分离到B2 菌株的vio 基因簇序列。为了减少蓝色素的合成对菌体生长的影响和解 决原始菌株需要低温长时间培养的问题，构建了vio 基因工程菌,现了B2 的vio 基因簇在恶 臭假单胞菌中的异源高效表达。工程菌株经过48 小时发酵培养产量比原始菌株提高了25%。 由于脱氧紫色杆菌素在蓝紫色素中的比例较小，很难分离得到足够的量来研究其性质和功 能，因此目前对其详细的功能还不是很清楚。本研究根据紫色杆菌素的已知合成途径，对合 成紫色杆菌素基因簇的D 基因进行敲除，构建了只合成脱氧紫色杆菌素的基因工程菌。合成 的脱氧紫色杆菌素产量达到1.4g/l,为原始菌株的10 倍左右。 关键词：紫色杆菌素，脱氧紫色杆菌素，恶臭假单胞菌，天然色素 引 言 紫色杆菌素(violacein) （图1-1）是微生物合成的一种代谢产物，由两个色氨酸分子氧化 缩合而成，属于吲哚衍生物，是非水溶性的蓝黑色色素。研究表明该色素具有很重要的生物 活性，具有潜在的广谱抗菌性、抗原生动物活性、抗病毒性、抗肿瘤细胞、遗传毒性及抗病 毒药物等多方面的功能。另外，紫色杆菌素抗可见光辐射(Antonio et al., 2004)，紫色杆菌素 可代替人工色素作为生物染料，对天然原料（如丝绸、棉、毛）及合成原料（如尼龙）都有 很好的着色效果 (Shirata, 2000) 。紫色杆菌素的这些重要的生物活性，已引起研究者的广泛 关注， HO 脱氧紫色杆菌素 紫色杆菌素 O O NH NH NH NH NH NH O O 图1 紫色杆菌素、脱氧紫色杆菌素结构式 Fig 1 Chemical structural formula of violacein and deoxyviolacein **通讯作者：邢新会：北京市清华大学化学工程系工物馆450 ； E-mail: xhxing@tsinghua. edu. cn ；TEL ： 010 *第一作者：蒋培霞（1978—），女，博士. E-mail：jpx@.tsinghua.edu.cn 从1867 年发现C. violaceum 以来，人们就开始对紫色杆菌素进行提取纯化研究(Reilly et al., 1927; Tobie, 1935)。已先后从细菌Chromobacterium violaceum、Chromobacterium fluviatile、 Janthinobacterium lividum 、Alteromonas luteoviolacea 等体内分离到紫色杆菌素。1959 年， DeMoss 等(Demoss et al., 1959)发现色素中除了紫色杆菌素外还有另外一种含量较少的物质 ——脱氧紫色杆菌素（deoxyviolacein ）。Ballantine 等(Ballantine,