基因芯片在内毒素刺激前后牙周膜细胞差异表达基因应用研究.pdfVIP

磨牙牙胚作为研究对象。胚胎14d大鼠下颌第一磨牙牙胚正处于发育全面启动的帽 状期，结果证实帽状期牙胚具有较强的牙齿形成能力。牙胚碎组织块可形成规则的牙 齿全层结构，说明这个时期牙上皮一间充质信号可局部存在并指导牙齿发育。帽状期 牙问充质碎组织块可独立形成牙本质牙髓复合体结构，证明了帽状期的牙问充质已 经获得上皮的成牙信号并开始发挥主导作用，而且这些信号分子在异位环境下仍可 继续发挥作用，指导牙齿组织的特异分化。出生1d大鼠下颌第一磨牙处于牙胚发育 的钟状末期，这个时期也是牙源性细胞特异性分化和矿化组织开始形成的时期。将这 个时期的牙胚碎组织和牙乳头碎组织分别异位移植后发现，除了所形成的牙齿样结 构外，还有骨样组织形成，由此我们推测，出生后处于钟状末期的牙胚碎组织在异位 环境下虽然仍具有形成牙齿结构的能力，但是由于其各部分细胞已经开始特异性分 化，所以外部环境的变化会影响其内部微环境的稳定，从而对精确的上皮间充质信号 网络造成一定的干扰，导致刺激性、修复性骨样牙齿结构的形成。将这个时期成釉器 的碎组织异位移植后没有形成釉质，仅可得到骨样组织，说明此时期成釉器不具备独 立形成牙齿结构的能力。当胚胎早期牙齿发育启动之后，成牙信号转而由牙间充质主 导．牙齿的类型由间充质细胞决定。提示发育后期牙源性上皮增殖、分化离不开间充 ’质的存在和信号指导。因此也说明釉质的发生不能脱离上皮和间充质的相互作用而 单独存在。 综上所述．本实验首先验证了牙胚相关组织在肾被膜下异位发育的可行性．并初步 明确了不同发育时期牙胚及其各解离部分在肾被膜下的发育能力，即发育早期牙胚信 号具有更强的牙齿形成能力。提示这个时期牙上皮和间充质之问信号网络所提供的微 环境可以更加完善和充分地指导牙齿的发育。为下一步构建适合种子细胞生长分化的 成牙微环境提供实验参考。 基因芯片在内毒素刺激前后牙周膜细胞差异表达基因的应用研究 张贤华 (解放军总医院口腔科) 牙周膜细胞是牙周组织的主要组成部分，具有一系列重要的功能，在牙周组织的 正常代谢和修复再生过程中起重要作用。在牙周致病菌的刺激下，牙周膜细胞生长受 到抑制，不能行使正常功能。因此研究牙周致病菌刺激前后牙周膜细胞基因表达谱对 了解牙周致病菌的致病机制、寻找防治措施具有重要意义。但以往的研究多限于一个 或几个基因。难以从基因的整体表达谱全面地观察牙周膜细胞对细菌刺激的反应模 式，近年来发展起来的基因芯片(genechip)技术打破了这种限制。基因芯片是指固着 在固相载体上的高密度DNA微阵列，具体地说就是将大量靶基因或寡核苷酸片段有 序地、高密度地排列在玻璃、硅等载体上的一项技术。基因表达谱芯片是目前应用得 最广泛的基因芯片，是将几百条到几千条基因特异的eDNA固定在一块基因芯片上， 对不同来源的mRNA进行检测，例如不同个体(正常人或患者)、组织、细胞周期、发 56 育阶段、分化阶段、病变、受到不同刺激的细胞等，对基因表达特异性进行综合分析。 基因芯片技术不仅可以对遗传信息进行定性、定量分析。而且扩展到基因组研究和基 因诊断等方面的研究．其发展和应用前景广阔。 本研究利用点样数为512的基因芯片分析中间普氏菌内毒素刺激前后人牙周膜 细胞的基因差异表达谱。芯片杂交所用的双探针分别以中间普氏菌内毒素刺激的牙 周膜细胞和未刺激的对照牙周膜细胞的mRNA为模板合成，前者标以Cy5荧光素， 后者标以Cy3荧光素。两次重复实验结果显示约14／512的已知基因具有3倍表达水 平的差异。每个点的Y轴为Cy5的杂交信号相对强度，X轴为Cy3的杂交信号相对 强度。45。角直线上的点Cy5／Cy3的比率为l，表示无表达差异，远离45。角直线的点 为差异表达基因。 牙周致病菌的内毒素是牙周炎的重要致病因子，在牙周炎的发生、发展中起关键 作用。内毒素是G一菌细胞壁外膜中的脂多糖，由类脂和多糖组成，类脂A是LPS的 生物活性中心，几乎可介导所有内毒素的生物学反应，各种G一菌类脂A的化学成分 和结构极其相似，是LPS结构中最保守的部分，无种属特异性，所以不同G一菌LPS 引起的毒性作用基本相似。牙周膜细胞是牙周组织的主要细胞，研究牙周致病菌 LPS对牙周膜细胞的作用。对了解牙周致病菌的致病机制、寻找防治措施具有重要意 义。 本研究利用基因芯片技术从基因的整体表达谱全面的观察牙周膜细胞对细菌 LPS刺激的