星海链霉菌卤化酶重组蛋白在大肠杆菌中可溶表达【精选】.pdfVIP

第54卷第3期 大 连 理 工 大 学 学 报 Vo1．54， No．3 2014年 5月 JournalofDalianUniversityofTechnology May 2 0 1 4 文章编号：1000—8608(2014)03-0278—07 星海链霉菌卤化酶重组蛋白在大肠杆菌中可溶表达 王 玉 梅 ， 赵 心 清 ， 马 昱 澍。， 魏 东 芝。 (1．大连理工大学 生命科学与技术学院，辽宁 大连 116024； 2．华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237) 摘要 ：大肠杆菌(Escherichiacoli，Ecoli)是表达异源蛋白的良好宿主，但常遇到蛋白表达 产物不可溶的困难．在对来 自星海链霉菌的卤化酶基因sinH 进行大肠杆菌异源表达时，为 克服蛋 白表达产物可溶性低的问题，探讨了不同载体对蛋 白可溶表达的影响．利用pET28a 进行 SinH表达时不能得到可溶的 目标蛋 白；使用含有泛素标签及 内含肽的载体 pHUIE实 现了卤化酶蛋 白SinH 的可溶表达，但纯化后纯度不高；利用带有链霉菌分子伴侣蛋 白基因 的载体 pET28a-SinH 与pETcoco—pL1SL2在 E．coliBL21(DE3)中共表达，在 3O℃，0．1 mmol／LIPTG诱导条件下表达 4h，成功获得大量可溶蛋 白，使用亲和层析(Ni-NTA)纯化， 获得了较纯的 目标蛋 白SinH，上述研究结果为在大肠杆菌中进行其他链霉菌蛋 白的可溶表 达提供 了参考． 关键词：卤化酶；星海链霉菌；可溶表达；泛素标签；链霉菌分子伴侣；共表达体 系；蛋白纯化 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A doi：10．7511／d11gXb2014O30O3 O 引 言 白连接形成成熟蛋白[5]，通过改变 pH，在温和的 条件下将融合蛋 白标签切除，从而实现蛋白的可 大肠杆菌 (Escherichiacoli，E．coli)具有繁 溶表达和融合蛋 白的自剪切[6]，但相关研究在链 殖速度快、培养成本低等优点，被广泛用作多肽、 霉菌蛋白表达中目前没有报道．此外，国外学者利 蛋白质的异源表达宿主，但在表达时常出现包涵 用含有链霉菌蛋 白分子伴侣 的载体 pETcoco- 体的形成造成蛋白不可溶的问题[1]．链霉菌基因 pLISL2，用表达的分子伴侣 GroEL、GroES与靶 组DNA中GC含量较高，其基因组编码 的蛋 白是 蛋白暴露的疏水表面作用防止错误的相互作用 8]， 多种重要的酶的来源，但链霉菌来源的蛋 自在大 肠杆菌中的表达产物不可溶的问题限制 了对链霉 在大肠杆菌中成功实现了较大的合成红霉素的聚 菌蛋白功能的分析[2]．应用融合蛋 白标签能够促 酮合成酶的其中一个多肽链 DEBS3(332kDa)的 进蛋 白的表达和正确折叠[3]，但 由于这些融合蛋 可溶表达[g]，表明链霉菌分子伴侣蛋 白对在大肠 白都比较大，可能影响 目标蛋白的活性，因此需要 杆菌中可溶表达链霉菌蛋 白具有促进作用． 使用特定的蛋白酶切除融合蛋白，这使得分离成 放线菌是革兰